1) 일반적 특성과 건강 관련 특성
본 연구에서는 자기보고식 설문지를 이용하여 일반적 특성으로 성별, 연 령, 학력, 결혼상태, 종교, 직업, 총 근로기간, 근무형태, 월평균 소득을, 건 강 관련 특성으로 흡연, 음주, 만성질환, 복용 중인 약물, 주관적 스트레스 정도를 조사하였다.
2) 수면의 질
본 연구에서는 수면의 질을 평가하기 위해 Buysse 등(1989)이 개발한 The Pittsburgh Sleep Quality Index (PSQI)를 Sohn 등(2012)이 K대학교 D병원 수면센터에서 한글화ㆍ표준화한 한국판 Pittsburgh 수면의 질 평가 척도(PSQI-K) 도구를 사용하였다. 도구는 지난 한 달 동안의 수면에 대해 주관적 수면의 질, 수면 잠복기, 수면 시간, 수면 효율, 수면 방해, 수면제의 사용, 주간 기능장애를 포함하는 7개의 하위영역으로 구성되어 있다. 각 영 역은 0-3점의 4점 척도로, 각 영역의 합산 총점은 최소 0점에서 최대 21점 까지로 점수가 높을수록 수면의 질이 나쁨을 의미한다. 도구개발 당시 신뢰
도 Cronbach’s α는 .83이었으며, Sohn 등(2012)의 연구에서는 .84, 신승화와 김수현(2020)의 연구에서는 .69였다.
절단점(cutoff value)은 Buysse 등(1989)이 개발할 당시에는 5점을 기준 으로 5점 초과 시 ‘poor sleep quality’로 수면의 질이 저하되었다고 판단하 였고, 5점 이하는 ‘good sleep quality’로 수면의 질이 좋다고 판단하였다.
Sohn 등(2012)은 수면장애 환자와 정상 대조군을 대상으로 신뢰도와 타당 도를 검증하여 PSQI-K의 절단점을 8.5점으로 제시하였고, 이후 신승화와 김수현(2020)의 연구에서는 간호사를 대상으로 신체활동 측정장치인 Fitbit charge 3 (FitBit Incorporated, San Francisco, CA, USA)를 이용하여 신뢰 도와 타당도를 검증한 결과 절단점이 6점 이상일 때 가장 적합하다고 보고 하였다. 본 연구에서는 절단점을 원저자인 Buysse 등(1989)이 제시한 5점 초과와 신승화와 김수현(2020)이 제시한 6점 이상을 반영하여 5점 초과를 절단점으로 설정하였다.
3) 염증성 사이토카인
본 연구에서는 수면의 질에 따른 염증과 면역반응을 반영하는 지표로서 전염증성 사이토카인인 IL-6, TNF-α의 혈중 농도를 측정하였으며, 10시간 이상의 공복 상태에서 대상자가 주로 쓰지 않는 팔의 중간팔오금정맥 (median cubital vein)을 통해 1회 10 ml 혈액을 채취한 후 혈청을 분리하 여 ELISA 방법으로 측정하였다. 분석 시약(assay kit)은 각각 상품화된 Human IL-6 Quantikine ELISA Kit 및 Human TNF-alpha Quantikine ELISA Kit (R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA)로 sandwich assay protocol에 따라 전문 혈액 분석회사인 S의과학연구소(검사기관번호 4184989*)에 의뢰하여 분석하였다.
4) 텔로미어 길이 및 미토콘드리아 DNA 복제수
본 연구에서는 전혈을 이용하여 백혈구 텔로미어 길이를 측정하기 위해,
10시간 이상의 공복 상태에서 대상자의 중간팔오금정맥을 통해 채취한 1 ml의 혈액으로부터 유전체 DNA를 추출한 후 qRT-PCR 방법으로 분석하 였다. 모든 실험과정은 K대학교 의과대학 의학유전학교실 실험실에서 의학 유전학 교수 1인과 실험 담당 연구원 1인의 지도를 받아 직접 분석하였다.
(1) DNA 추출
연구대상자의 전혈로부터 DNA를 추출하기 위해 상품화된 분석 시약인 QIAamp Blood Midi Kit (QIAGEN, Hilden, Germany)를 이용하여 제조사 의 지시에 따라 spin protocol로 추출하였다.
(2) 흡광도 측정 및 희석
NanoDrop One 분광광도계(Thermo Fisher Scientific Inc., Wilmington, DE, USA)를 이용하여 흡광도 측정 후 A260/A280 비가 1.8 이상인 DNA만 을 사용하여 nuclease-free H2O를 이용하여 1 ng/ul로 희석한 다음 골고루 섞이도록 하였다.
(3) 텔로미어 길이 및 미토콘드리아 DNA 복제수 측정
Absolute Human Telomere Length and Mitochondrial DNA Copy Number Dual Quantification qPCR Assay Kit (ScienCell Research Laboratories, Carlsbad, CA, USA)를 이용하여 1 ng/μl로 희석한 유전자를 제조사의 지시에 따라 qRT-PCR 방법으로 분석하였다. qRT-PCR을 위한 혼합물의 조성은 2X GoldNStart TaqGreen qPCR master mix 10 μl, 시동 체(primer)로서 단일 복사 참조 시동체(single copy reference primer) 세트, 사람 텔로미어 시동체(human telomere primer) 세트, 미토콘드리아 DNA 시동체(mitochondrial DNA primer) 세트 각 2 μl, 그리고 1 ng/ul로 희석한 대상자 DNA 2 μl 또는 참조 인간 유전체 DNA 검사물(reference human genomic DNA sample) 1 μl와 적정량의 증류수를 첨가하여 총 20 μl가 되 도록 하였다. well (96 well Hi-Plate for Real Time, Takara Bio Inc, Otsu, Shiga, Japan)에 분주된 모든 대상자 DNA와 참조 인간 유전체 DNA
검사물은 총 3회 반복 측정(triplicate) 후 Cq (quantification cycle value)의 표준편차가 0.5 미만인 자료만을 분석에 이용하였다. Thermal Cycler Dice Real Time System (Takara Bio Inc, Otsu, Shiga, Japan)을 이용하여 qRT-PCR을 시행하였으며, 초기 변성(initial denaturation)은 95 ℃에서 10 분, 변성(denaturation)은 95 ℃에서 20초, 붙임(annealing)은 52 ℃에서 20 초, 연장(extension)은 75 ℃에서 45초, 변성에서 연장 단계까지 40주기를 반복 시행하였다. 산출된 Cq 값은 Cawthon (2002)과 O'Callaghan, Dhillon, Thomas와 Fenech (2008)의 연구를 근거로 텔로미어 길이는 각 염색체 말 단(per chromosome end)를 기준으로 한 kb (kilobase pair) 단위로 산출하 였으며, 미토콘드리아 DNA 복제수는 각 이배체 세포(per diploid cell)를 기 준으로 제조사의 지시에 따라 산출하였다.