Ⅱ. 재료 및 방법
5. 대장암 세포에서 Doxorubicin에 의한 Apoptosis 유발
DNA 단편화는 apoptosis의 전형적인 특징이며[23], 골육종세포에서 Doxorubicin 처리에 의해 sub-G1기의 세포 빈도와 DNA 단편화가 증가한다고 보고되었다[28]. Fig. 8에 나타나듯이 HCT116과 HT29 세포 모두에서 Doxorubicin을 처리하지 않은 대조군에 비해 Doxorubicin을 처리한 군에서 DNA 단편화가 확인되었으며, Doxorubicin의 농도가 증가할수록 DNA 단편화 또한 증 가함을 확인하였다.
Fig. 8. DNA fragmentation assay for apoptosis detection. Agarose gel electrophoresis of fragmented cellular DNA induced by Doxorubicin treatment.
6. 대장암 세포에서 Doxorubicin에 의한 Inhibitor of Apoptosis Protein 발 현 변화
HCT116과 HT29 세포에서 Doxorubicin에 의해 apoptosis의 특징인 sub-G1 arrest와 DNA 단편화를 확인하였다. Doxorubicin에 의한 apoptosis가 IAP 발현 량의 변화와도 관련이 있는지 IAP 중 survivin, XIAP, cIAP-1과 cIAP-2의 발현 량 변화를 mRNA 수준에서 확인하기 위해 RT-PCR을 진행하였다. Fig. 9A에서 보이는 바와 같이 HCT116 세포에서는 Doxorubicin에 의해 survivin과 cIAP-1가 감소하는 것을 확인하였고, HT29 세포에서는 XIAP가 감소하는 것을 Fig. 9B를 통해 알 수 있었다.
Fig. 9. RT-PCR analysis of mRNA expression levels of survivin, XIAP, cIAP-1 and cIAP-2. HCT116 (A) and HT29 (B) cells were treated Doxorubicin. RT-PCR products were separated on 1.5% agarose gel and stained with ethidium bromide.
Ⅳ. 고 찰
통해 발현되고, eNOS와 nNOS는 Ca2+ 의존성 경로를 통해 발현되는 것으로 알
포의 발생을 유도하게 된다[17]. 본 연구 결과에서 HCT116 (p53-WT)과 HT29 (p53-MUT)의 차이는 apoptosis와 밀접한 관련이 있는 p53 유전자의 발현 차이 에 의한 것임을 알 수 있었다. 따라서, Doxorubicin은 인간 대장암 세포에서 내 인성 산화질소의 생성을 증가시켜 apoptosis를 유발을 하지만 p53 유전자의 영향 을 받는다는 것을 알 수 있었으며, in vivo 실험을 통해 p53 유전자와 내인성 산 화질소에 의한 Doxorubicin의 항암 효과 증대에 관한 연구를 진행시켜야 할 것 으로 생각된다.
Ⅴ. 참고문헌
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Ⅵ. 요 약
Doxorubicin은 광범위한 암을 치료하는데 사용되는 일반적인 항암제이지만, 내 인성 산화질소 생성량과 Doxorubicin의 항암 효과의 상관관계에 대해서는 아직 명확하게 밝혀지지 않았다. 본 연구에서는 인간 대장암 세포에서 Doxorubicin의 항암 활성에 내인성 산화질소가 미치는 영향을 확인하고자 하였다. HCT116 (p53-WT)과 HT29 (p53-MUT) 세포에서 Doxorubicin 처리에 의해 세포 생존율 의 차이를 보였으며, NMA 병행처리는 Doxorubicin의 효과를 감소시켰음을 확인 할 수 있었다. 또한 HCT116과 HT29 세포에서 sub-G1기의 세포 빈도와 DNA 단편화의 결과를 통해 내인성 산화질소가 Doxorubicin에 의한 apoptosis를 조절 하는 것을 확인하였다. 본 연구 결과를 종합해보면, 인간 대장암 세포에서 내인 성 산화질소와 IAP 발현, p53의 상태에 따른 조절이 Doxorubicin에 의해 유도된 다는 것을 보여주며, 이러한 메커니즘은 대장암에서 화학요법의 효율을 향상시키 기 위한 전략적인 표적으로 이용할 수 있을 것으로 생각된다.