HPLC – 방부제 분석
2
학년
A반 류정미
1. 학습 목표
액체 크로마토 그래피의 원리에 대하여 설명할 수 있다 .
액체 크로마토 그래피의 기기 구성 역할 과 조작법을 정확하게 설명할 수 있다 .
액체 크로마토 그래피를 이용하여 성분 을 분석하고 화장품분석 응용에 있어서
의 중요성을 알 수 있다 .
2. HPLC 에 대해서
혼합물속 의 성분이 2
가지의 상인 이동상과 , 고정상에 분배에 의해 분리되는 물리적인 분리 법으로 크로마토그램을 그려내는 시스템이다 .
높은 감도로 쉽고 정확하게 정량할 수 있고 , 비
휘발성 성분 또는 열적으로 불안정한 물질을 쉽
게 분리 할 수 있다 .
3. HPLC 의 hardware 구성
이동상 펌프
시료주입기 검출기
데이터 장치
시료용액을 컬럼에 주입하면 이동상은 시료 를 이동시킨다 .
용매를 흡입하여 전 기기에 전달해주는 역할 을 한다 .
분석물질을 용매의 흐름에 연결시켜주는 역 할을 한다 .
충진물 , 시료 , 용매의 상호 작용에 의해 혼 합물 속의 분석 대상물질을 분리한다 .
분석대상물질을 시간 간격에 따라 기기적으 로 인지하여 전기적 신호로 바꾸어 준다 .
4. 조작법
펌프의 전원을 키고 메뉴에서 FLOW 를 맞추고 유 속을 정한 후 RUN
을 누른다 .
시료주입기와 검출기의 전원을 키고 컴퓨터 시스템 을 작동시킨다 .
검출기에서 분석하고 자는 물질의 파장을 정하고 A UTO ZERO 를 눌러 변하지 않으면 분석을 시작한 다 .
분석하기 전에 펌프에 연결된 용매의 흐름을 확인한
다 .
5. 방부제 분석
실험방법
- 0.1% 표준용액 : 주사기로 2 ㎛이하를 취해 분석한다 . ( 시료를 주입한 후 injection 방향으로 돌려 준다 .)
- 혼합용액 , 시료용액 : 주사기로 40 ㎛이상을 취해 분석한다 . - 시료주입기 세척 : 용액을 시료주입부에 주입한 후 Load 방향
으로 돌려서 주입주사기를 이용하여 메탄올로 10~20 번 정도 세척한다 .
유속
: ml/min분석시간
: 10분 이동상
: 70%메탄올
컬럼
: c18파장
: 254분석조건
: iso cratic5. 방부제 분석
0.1% MP, EP, PP, BP 표준용액 만들 기
- 비이커에 방부제를 0.1g 을 정밀하게 달아 메탄올로 녹여 주면서 100ml 용량 플라스크에 넣어준다 . 비이커에 남아 있는 방부제가 없도록 표시선까지 계속 헹구어주면서 넣는 다 . 각각 해당하는 방부제도 같은 방법으로 표준 용액을 만 들어 준다 .
- 0.1% 표준 용액을 만들어 방부제의 피크가 어느 부분 에서 나오는지 확인하고 , 0.1% 표준용액을 희석시켜 0.001%, 0.003%, 0.005%, 0.007% 혼합용액을 만 들어 분석시간을 단축시킨다 .
0.1% 표준용액 크로마토그램
5. 방부제 분석
0.001% MP, EP, PP, BP 혼합용액 만 들기
- 각각 방부제의 0.1% 표준용액 1ml 를 취하여 100ml 용량플라스크에 넣고 메탄올로 표시선까지 채운 다음 잘 혼합되도록 섞어준다 .
MV = M’V’
0.1% × xml = 0.001% × 100ml
- 0.003%, 0.005%, 0.007% 혼합용액도 같은 방법으로 만들어 준다 .
혼합용액 크로마토그램
5. 마사지크림 방부제 분석
- 100ml 용량플라스크에 제품 2g 을 주사기로 취한다 . ( 벽면에 묻지 않게 주의한다 ) 메탄올로 채운 다음 흔들어 제품과 잘 섞이 게 한다 . 잘 섞이지 않을 경우 메탄올을 표시선까지 채워 sonic ation 을 시켜준다 . 제품과 메탄올이 적당히 섞이면 마이크로 실 린지로 시료용액을 두 · 세번 정도 걸러 준다 .
시료용액 만들기
* 마사지 크림 : MP 함량 0.2% PP 함량 0.1%
제품의 방부제함량 구하는 방법
방부제함량 = (g) / 시료를 취한 양 (g)× 100
시료용액 크로마토그램
방부제마다 용리 시간이 다른 이유
HPLC 에서 정성분석과 정량분 석
정성분석
- 분리된 화합물의 머무름 시간과 표준물질의 머무름 시간의 일치를 확인하여 같은 화합물임을 확인
정량분석
- 표준화합물의 농도를 다르게하여 얻은 피크의 면 적과 농도와의 관계식 ( 검량선식 ) 을 구하고 분석용 액의 크로마토그램에서의 같은 머무름시간의 피크 면적을 구하여 검량선식으로 농도를 계산하여 분석
시료의 농도를 알 수 있다 .
검량선