대한임 상병 리 사회 지 : 제 21 권 제 1 호 1989
von Willehrand factor의 검 사
서울대학교병원 임상병리과 · 송운흥. 이숙경
서 론
von Willebrand씨 병(이후 vWD로 약함)은 유전성 의 출혈성 질환1)이 며， 1926 년에 von Willebrand에 의해 ‘유전성 가혈우병’으로 처음 보고되었다 2) 이 질환은 혈소판 수는 정상임에도 출현시간이 연장되는 특정을 지니나， 임상 소견， 검사 소견， 유전 인자의 표현들이 매우 다양하고 한 환자에서도 시기에 따라 양상이 다르므로， 진단 기준3뼈)에 대해 논란이 있고 또한 여러 유형으로의 분류도 주장되고 있다.
출혈 시간의 연장， 혈소판 부착능의 감소， 제 때 응고 인자의 감소， ristocetin에 대 한 혈소판 응집 장애 6)7)등으로 vWD를 진단하게 되는 데， 이중 제 VII 응고 인자의 구성 성분 중에서 von Willebrand factor(
ristocetin cofactor, 이하 vWf라 약함)의 측정이 가장 진단적 가치 5)7)를 지난다.
본 병원에서는 vWf assay를 새로 도입하였기에 그 방법을 소개하고자 한다.
론
본
vWf 검 사는 Organon사의 vW f assay kit를 이 용하 였다.
이 kit로 두 가지 방법으로의 검사가 가능하다. 즉，
수동법 과 aggregometer를 이 용한 방법 이 다. 이 방법 의 원리， 시약 제조 및 각 방법은 아래와 같다.
이 방법의 원리는 vWf에 대한 수용체를 가지고 있는 혈소판을 혈장 내의 인자와 결합시킨 후， rist-
ocetin 을 첨가하면 혈소판의 웅집이 얼어나게 된다.
이때 혈장 내의 vWf 인자의 농도는 응집이 되는 정도나 시간에 직접 비례한다.
필요한시약
1. 동결건조된 혈소판
2. ristocetin 3. TES buffer
4. 정 상 참조 혈 장 (normal reference plasma) 5. 정 상 대 조 혈 장 (normal control plasma)
6. 비 정 상 대 조 혈 장 (abnormal control plasma)
시약 제조 및 주의사항
1. 동결건조 혈소판; 한 병에 증류수 2ml를 첨가 혼합 후， 실온에 30분 방치하여 잘 녹인다.
2. ristocetin: 한 병 에 증류수 0.6ml를 첨 가 혼합 후， 냉 장고에 30분 둔 후 사용한다.
3. 정상 참조 혈장; 한 병에 TSE buffer 1ml를 혼합 첨가 후， 실온에 30분 두어 잘 녹인 후 사용한 다.
4. 정상 대조 혈장; 한 병에 TSE buffer 1ml를 첨가 혼합 후， 실온에 30분 두어 잘 녹인후 사용한 다.
5. 비정상 대조 혈장; 한 병에 증류수 1ml를 첨가 혼합 후， 실온에 30분 두어 잘 녹인후 사용한다.
주의사항; 모든 시약의 유효 기간은 시약 제조 후 8시간 이내이다.
검 체 : 3.8% sodium citrate로 1 :9(Hct 45% 일 때 ) 비율로 채혈후 즉시 분리한 혈장.
검체 보관:
1. 즉시 검사하는 것이 좋다.
~. 4시간이내 검사할 수 있으면， 냉장고에 보관한 다.
3. 4시간이내 검사할 수 없으면， 검체를 -20"C 로 급격히 열린다.
열린 검체를 녹얼 때는 3TC 에서 빨리 녹여 샤용한 다.
열린 겸체라도 30일이내에 검사해야 한다.
A. 수동법
수동법에는 슬라이드법과 시험관법이 있다.
여기는 슬라이드법을 설명한다.
방법
1. 혈소판 O.1ml에 검 체 0.005ml 첨 가 후， ristocetino.
0.0025ml를 넣고 혼합한다.
2. 혼합하면서 동시에 스톱 위치를 누른다.
3.4+ 의 응집이 얼어날 때까지 조심스럽게 계속 흔든 다.
4.4+ 의 응집이 이루어지는 시간을 캡다.
-9-
5. 표준 곡선에서 시간에 대한 vWf의 활성을 계산한 다.
표준곡선은 검사 시행전에 희석하지 않은 혈장(100
%)" 1:2(50%), 1:4(25%) 1:8 (12.5%) 로 희석하여 시험관법으로 작성한다.
참고치 : 52-136% (2SD, CV=8-20%) B. aggregometer 이 용법
검사준비:
1. 혈소판 준비 : 중류수 2ml를 섞은 혈소판에 TES buffer 3ml를 섞 는다.
2. 대조와 검체 준비; 대조와 검체의 표시를 하고
TES buffer로 1:2 희 석 한다. (100% plasma) 즉시 검사해야 하며 보관은 2-8C 에서 30분까지이 다.
3. bla따‘ 준비 (ppp): aggregometer 시 험 관에 만든 혈소판 O.1ml, 100% 정상 참조 혈장 0.25ml
( 즉 1 : 2 normal reference plasma) 0.15ml TES
buffer 를 넣어 거품이 생기지 않도록 섞는다ι
방법 : 1. 0.2ml 혈소판에 100% 혈 장 0.25ml를 섞 은 후 stir bar를 넣는다.
2. aggregometer에 두어 37C 2분간 방치 한다.
3. 이 미 30-60초동안 baseline을 그린 chart에
recorder를 그린다.
4. ristocetin 0.05ml를 첨 가한 후 웅집 을 관찰한다.
5. 표준 곡선과 .비교하여 단위 시간당 percent transmission의 변화를 결정 한다.
참고치 : 50-150% 100% 가 념을 때는 2배(즉 1 : 4) 희석하여 검사하고 결과에 2배한다.
12.5% 가 안 될때는 희석하지 않은 것으로 검사하여 2로 나눈다.
본 검사실에서 처음엔 슬라이드법으로 도입했으나，
aggregometer를 이용하여 실시하고 있다.
어느 방법이든 검사실 실정에 맞추어 선택하면 되겠 다.
중례 보고.
중례 1 .10세 여아로 빈발하는 비출혈을 주소로 내원 하였다. 과거력상 혈관절중의 소견은 없었다. 검사 소견상 혈소판 수는 333,000/ mm3 이었고， 출혈시간 은 7분으로 연장， aPPT가 44초로 연장되었으며， 혈소 판 부착능 4%로 현저한 감소가 있었다. factor 때 procoagulant activity 감소， vWf 1.6%로 현저한 감소 가 있었다. ristocetin에 대한 혈소판 응집은 정상으로 vWd type IIb로 확진하였다. (이 예는 1984년 중례 보고되었음)
LABORATORY FINDINGS OF THE PATIENTS WITH VON WILLEBRAND’S DISEASE
Test lites methOd
Bleeding time Duke
Prothrombin time Dade
Activated' PTT Dade
Platelet ' count Automatic‘ count
Plt. morphology W right stain Plt. adhesiveness Glass bead Plt. aggregation Aggregometer
Factor Ab( 때 ) activity One stage
vWF Organon
Factof Ab( 뼈 ) Bethesda unit
뼈 :C One stage
VI:R Ag RID
Factor IX One 'stage
-
때 : C-Factor 때 procoagulant activity
뼈 R: Ag-Factor 뼈 related antigen
normal range 1-3'30"
12", INR: 1.2 • (100-80%) 30-45"
150-350 (xlO00 / mm3) Normal 31-85%
N
60-140%
52-136%
negatIve 60-140%
60-140%
60-140%
-10-
중례 1 중례 2 중례 5
7 3'50" 5'30"
13"(82%) 1.05(92%) 1.11(90%)
44" 34" 49"
333 486 323
N N N
4%
N Ristocetin : no agg.
42% 40% 25%
1.6% 24% 9%
(Behring, N:64%)
30% negative
30%
39%
42% 90% 60%
• • • • • •
중례 2.36세 여자로서 피부 반점을 주소로 내원하였 다. 과거력상 별 특이 소견 없었다. 출혈성 경향에 대한 검사를 실시하였다. 혈소판 수는 486,000 / mm3 , 출혈 시간 3분 50초， PT와 aPTT는 정상이었다.
ristocetin에 대 한 혈소판 웅집 이 없고， 정 상 혈 장 첨 가 후 교정되었다. vWf는 24%로 감소되어 있었다. 이로 써 vWd 라 진단하였다.
중례 3.8세 여아로 잘 멈추지 않는 비출혈을 주소로 입원하였다. 과거력상 출혈이 잦고 멍이 잘 든다고 하였다. 웅고검사 소견은 혈소판 수 323,000 / mm3 , 출혈시간 5분 30초， aPTT가 49초로 연장되었다.
Factor 뻐흔 짧%로 감소해 있고 vWf는 9%로 현저
한 감소를 보였다. Factor IX 는 60% 였다. 이 상의 검사 소견과 임상 소견으로 vWd 라 진단하였다. (증례 는 표1 에 정리하였다. )
걸 론
vWd는 혈소판 수， 출혈시 간， PT, aPTT, 혈소판 웅집능 검사， 혈소판 부착능 검사， vWf검사 둥으로 진단할 수 있다. 이 중 진단적 가치가 높은 vWf 검사 를 도입하였기에 그 방법을 소개하고， 경험한 vWd
의 예를 간단히 설명하였다.
References
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-11-
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