송우용·박태현 1 ·전소영 2 ·성현아 3‡ ·신수정 †

펄프·종이기술 50(4) 2018

102

셀룰로오스 분해 능력을 갖는 세균의 셀룰로오스 나노 섬유 현탁액 오염 방지를 위한 첨가제 탐색

송우용·박태현 ¹ ·전소영 ² ·성현아 ^3‡ ·신수정 ^†

접수일(2018년 7월 27일), 수정일(2018년 8월 14일), 채택일(2018년 8월 17일)

Addition of Preservatives for Cellulose Nanofibril Suspension Against Cellulase Containing Bacteria

Woo-Yong Song, Tae Hyeon Park ¹ , Soyoung Juhn ² , Hyun-A Seong ^3‡ and Soo-Jeong Shin ^†

ABSTRACT

To prevent cellulase-containing bacterial contamination in cellulose nanofibril suspension, addition of pre- servatives in suspension was investigated. Without preservatives, viscosity was drastically decreased 74.8%

by S. xylosus and 78.1% by B. subtilis. With more than 1.2% of phenoxyethanol addition, there was no bac- terial contamination with small viscosity decrease. With 1.2% of 1,2-hexanediol addition, there was bacterial contamination observed by microscopic obervation and viscosity decrease. With 1.6% of 1,2-hexanediol ad- dition, there was small bacterial contamination but no viscosity decrease. In case of sodium azide addition, this was less effective as preservatives than phenoxyethanol or 1,2-hexanediol.

Keywords: Cellulose nanofibrils, Staphylococcus xylosus, Bacillus subtilis, viscosity, cellulose degradation

Printed in Korea http://dx.doi.org/10.7584/JKTAPPI.2018.08.50.4.102

• 충북대학교 목재종이과학과(Department of Wood and Paper Science, Chungbuk National University, Chungbuk, 28644, Korea) 1 네이처코스텍 주식회사

2 소영코스메틱 주식회사

3 충북대학교 생화학과(Department of Biochemistry, Chungbuk National University, Chungbuk, 28644, Korea)

† 교신저자(Corresponding Author): E-mail: [email protected]

‡ 공동교신저자(Co-corresponding Author): E-mail: [email protected]

J. of Korea TAPPI Vol.50 No.4 Jul-Aug. 2018 103

1. 서 론

나노셀룰로오스는 셀룰로오스를 물리, 화학, 생물학적 처리 방법을 통해 나노단위로 가공한 것을 말한다. 나노 셀룰로오스는 제조 방법에 의해 구분되며, 물리적 처리에 의한 셀룰로오스 나노피브릴, 화학적 산 가수분해에 의한 셀룰로오스 나노크리스탈, 박테리아에 의해 합성된 박테 리아 셀룰로오스 등으로 분류된다.

나노단위로 가공된 셀룰로오스는 종횡비와 비표면적이 커 강도와 탄성계수 가 높으며, 치수 안전성, 친환경성 등의 장점을 가진 물질 로 주목받고 있다.

나노셀룰로오스는 비표면적이 커짐에 따라 물과 수소결 합 능력이 증가하여 건조가 매우 어려울 뿐만 아니라 건 조과정에서 나노셀룰로오스 간 수소결합에 의해 응집이 발생한다. 이렇게 응집되어 건조된 나노셀룰로오스는 나 노화 과정에서 증가된 비표면적이 감소하고, 이 때문에 나노셀룰로오스의 우수한 성질이 감소한다. 나노셀룰로 오스의 건조 문제를 해결하기 위해 분무 건조 방법과, 동 결 건조 방법이 고안되었다.

하지만 두 가지 방법 모 두 건조과정에서 나노셀룰로오스 입자가 일부 응집되며, 건조 전의 나노셀룰로오스가 가지는 물성을 완전히 회복 하지 못한다. 위의 건조 방법의 문제점을 해결하기 위해 나노셀룰로오스를 코팅하여 건조하는 방법이 고안되었 다. 코팅제로 계면활성제, 당류가 사용되며, 이러한 물질 이 나노셀룰로오스 입자를 둘러싸고, 건조 과정에서 나 노셀룰로오스 간 응집되는 것을 방해한다.

나노셀룰로오스를 활용하기 위해 위처럼 많은 연구가 진행된 반면, 나노셀룰로오스를 건조하지 않고 활용하는 방법에 대해 연구도 진행되고 있다. 건조되지 않은 나노 셀룰로오스 현탁액은 점탄성이 우수하고, 수분 친화력이 높아 수분 유지력이 좋다. 이러한 특성을 가진 나노셀룰로 오스 현탁액은 화장품, 페인트, 시멘트 등에 사용된다.

나노셀룰로오스 현탁액은 일반적으로 물에 분산된 상태 로 사용하여 미생물에 의해 쉽게 오염될 수 있다. 특히 공 기 중에는 셀룰로오스를 분해하여 영양원으로 삼는 고초균, 검은 곰팡이 등의 미생물이 있기 때문에 쉽게 오염된다.

나노셀룰로오스는 셀룰로오스를 잘라 나노단위로 제조 된 물질이기 때문에 셀룰로오스에 비해 더 쉽게 오염될 수 있다. 이러한 특징 때문에 현탁액을 무균 상태로 제조 한다고 해도 작업 중 잠깐의 공기 노출에 의해 오염될 수 있다. 나노셀룰로오스 현탁액이 셀룰로오스 분해 미생물

에 의해 오염될 경우 급격한 점도 저하 문제가 발생할 수 있으며, 특히 나노셀룰로오스를 현탁액으로 사용하고자 할 때 주요 물성인 점탄성이 매우 크게 감소한다.

본 연구에서는 나노셀룰로오스 현탁액이 세균에 의해 오염되었을 때, 발생하는 물성 저하를 점도를 통해 측정 하였다. 그리고 나노셀룰로오스 현탁액의 보존성 향상을 위해 보존제를 첨가하였을 때, 미생물 오염 방지 효과를 확인하고자 한다.

2. 재료 및 방법

2.1 공시재료

나노셀룰로오스 제조에 사용한 펄프는 M사의 활엽수 표백 크라프트 펄프를 사용하였으며, 카르복시메틸화에 사용한 시약은 수산화나트륨, 염화아세트산, 에탄올을 사용하였다. 미생물 오염 방지를 위한 보존제로는 페녹시 에탄올, 1,2-헥산디올, 아지드나트륨을 사용하였다.

2.2 실험 방법

2.2.1 카르복시메틸화 전처리

나노셀룰로오스를 제조하기 이전 전처리로 카르복시메틸 화 처리를 하였다. 카르복시메틸화 전처리는 펄프 100.0 g 에 수산화나트륨 19.7 g이 용해된 에탄올 2 L을 혼합하여 상온에서 두 시간 이상 방치하였다. 방치된 펄프에 염화아 세트산 21.7 g이 용해된 에탄올 500 mL를 혼합하여 70℃

에서 두 시간 반응시켜 카르복시메틸화를 실시하였다. 반 응이 종료된 펄프는 에탄올을 제거한 후 아세트산과 증류 수를 사용하여 pH 6-7이 되도록 중화, 세척한 후 나노셀 룰로오스 제조에 사용하였다.

2.2.2 나노셀룰로오스 제조

카르복시메틸화 전처리된 펄프를 1%(w/w)로 희석 후 고압균질기를 통과시켜 나노셀룰로오스를 제조하였다.

나노셀룰로오스 제조에 사용한 고압균질기(PANDA PLUS, GEA, Italy)의 사용 조건은 최초 100 bar에서 1 회 통과 이후 2회 통과부터는 600 bar로 압력을 조절하 였다. 최종 통과 횟수는 최소 통과횟수를 포함하여 7회 통과시켜 셀룰로오스 나노피브릴을 제조하였다.

미생물 오염 방지를 위한 첨가제가 포함된 나노셀룰로

오스는 각 보존제를 0.4, 0.8, 1.2, 1.6%(w/w)를 첨가한

펄프·종이기술 50(4) 2018

104

후 위 제조방법으로 제조하였다.

2.2.3 오염 미생물 배양액 제조

나노셀룰로오스 오염 미생물로 S. xylosus(Staphylo- coccus xylosus, KCCM 40887)와 B. subtilis(Bacillus subtilis, KCCM 11316)을 한국미생물보존센터에서 분양 받아 사용하였다. 생육배지는 보통 배지(beef extract 30.0 g/L, peptone 5.0 g/L)를 사용하였으며, 30℃ 진탕 배양기에서 하루 동안 배양하였다. 하루 동안 배양된 S.

xylosus와 B. subtilis 배양액 5.0 mL을 취해 새로운 nutrient 배지 50 mL에 분주한 후 하루 동안 배양하여 나노셀룰로오스 현탁액에 분주할 배양액을 제조하였다.

2.2.4 나노셀룰로오스 현탁액 내 오염 미생물 배양

나노셀룰로오스 현탁액의 미생물에 대한 오염을 확인하 기 위해 나노셀룰로오스 현탁액에 오염미생물 배양액을 접종 후 배양하였다. 나노셀룰로오스 현탁액을 100 mL 삼각플라스크에 20.0 g을 넣은 후 고압멸균기로 121℃, 15분간 멸균을 실시하였다. 멸균된 나노셀룰로오스 현탁 액에 S. xylosus와 B. subtilis 배양액 1 mL를 접종한 후 25℃ 진탕 배양기에서 3일간 배양하였다. 보존제가 첨가 된 나노셀룰로오스 현탁액도 같은 방법을 반복하여 실시 하였다.

2.2.5 오염된 나노셀룰로오스 현탁액의 미생물 검출

나노셀룰로오스 현탁액의 미생물 오염 여부를 확인하기 위해 미생물이 배양된 나노셀룰로오스 현탁액을 고체배 지에 도말하여 확인하였다. 사용된 고체배지는 보통 한천 배지를 사용하였다. 오염된 나노셀룰로오스 현탁액 1 mL 를 고채배지에 도말하고, 후 25℃ 진탕 배양기에 24시간 배양 후 배양된 미생물의 콜로니를 확인하여 오염 여부를 확인하였다.

2.2.6 투과전자현미경 분석

카르복시메틸화 전처리된 활엽수 표백 크라프트 펄프로 제조된 나노피브릴의 크기를 분석하기 위하여 투과전자 현미경 분석을 실시하였다. 분석하기 위한 그리드 제조 방법은 나노피브릴을 0.01%(w/w)로 희석한 후 300 mesh 카본그리드에 위치시킨 후 아세트산 우라늄으로 음영염 색을 하여 관찰용 샘플을 제조하였다. 투과전자현미경 (Libra 120, Carl Zeiss, Germany) 관찰 조건은 가속전

압 120 kV에서 관찰하였으며, 나노피브릴 섬유 50개의 폭 크기를 측정하여 분석하였다.

2.2.7 오염된 나노셀룰로오스의 점도 측정

나노셀룰로오스 현탁액의 물성과 미생물 오염에 따른 물성 저하를 측정하기 위해 레오미터를 사용하여 점도 측 정하였다. 점도측정기(MCR 102, Anton Paar, Austria) 사용조건은 측정 툴은 D-PP 25를 사용하여 나노셀룰로 오스 현탁액의 점도를 측정하였다.

3.결과 및 고찰

3.1 제조된 나노셀룰로오스의 미생물 오염 특성

카르복시메틸화 전처리된 활엽수 표백 크라프트 펄프로 제조된 나노셀룰로오스의 폭 크기를 측정하기 위해 투과 전자현미경 분석 결과를 Fig. 1에 나타내었다. 투과전자 현미경을 통해 폭 크기를 확인한 결과 3.2-7.7 nm(평균 4.8 nm)의 크기를 갖는 나노셀룰로오스가 제조된 것을 확인하였다.

나노셀룰로오스 현탁액에 S. xylosus와 B. subtilis 배 양액을 접종하여 나노셀룰로오스 현탁액을 오염시킨 후 점도를 측정한 결과를 Fig. 2에 나타내었다. 제조된 나노 셀룰로오스의 점도는 8,321 mPa·s로 확인 되었으며, S.

xylosus와 B. subtilis에 의해 오염된 나노셀룰로오스 현 탁액의 점도는 크게 감소하였다. 나노셀룰로오스 현탁액 의 점도가 감소하는 원인 중 미생물에 의한 점도 감소 효 과는 미생물이 분비하는 셀룰로오스 분해 효소에 의한 효 과이다. 때문에 두 세균 배양액을 나노셀룰로오스 현탁액 에 접종하였을 때, 세균에 의한 나노셀룰로오스의 분해

Fig. 1. Transmission electron microscopy image of nanocellulose (scale bar:

200 nm).

나노셀룰로오스 현탁액에 S. xylosus와 B. subtilis 배양액을 접종하여 나노셀룰로 오스 현탁액을 오염시킨 후 점도를 측정한 결과를 Fig. 2에 나타내었다. 제조된 나노 셀룰로오스의 점도는 8,321 mPa·s로 확인 되었으며, S. xylosus와 B. subtilis에 의 해 오염된 나노셀룰로오스 현탁액의 점도는 크게 감소하였다. 나노셀룰로오스 현탁액 의 점도가 감소하는 원인 중 미생물에 의한 점도 감소 효과는 미생물이 분비하는 셀 룰로오스 분해 효소에 의한 효과이다. 때문에 두 세균 배양액을 나노셀룰로오스 현탁 액에 접종 하였을 때, 세균에 의한 나노셀룰로오스의 분해가 발생하였으며, 이로 인해 나노셀룰로오스 현탁액의 점도가 크게 감소한 것으로 판단된다.

B. subtilis는 일반적으로 셀룰로오스 분해 효소를 생산하는 세균으로 알려져 있으 며, 셀룰로오스를 분해하는 효소를 생산하는 세균으로도 사용된다.¹⁸⁾S. xylosus의 경우 일반적인 셀룰로오스 분해 미생물은 아니지만 탄수화물을 영양원으로 하는 병원 성 세균이다.¹⁹⁾ B. subtilis의 경우 셀룰라아제를 가지고 있기 때문에 나노셀룰로오스 현탁액에 접종 되었을 때, 셀룰라아제에 의한 나노셀룰로오스 분해가 진행된 것으로 판단된다. S. xylosus의 경우 B. subtilis처럼 셀룰라아제 활성이 높지 않지만 셀룰라 아제를 가지고 있어 B. subtilis와 같이 나노셀룰로오스 분해에 의해 점도 저하를 발 생시킨 것으로 판단된다.

Fig. 1. Transmission electron microscopy image

of nanocellulose (scale bar: 200 nm).

J. of Korea TAPPI Vol.50 No.4 Jul-Aug. 2018 105

가 발생하였으며, 이로 인해 나노셀룰로오스 현탁액의 점 도가 크게 감소한 것으로 판단된다.

B. subtilis는 일반적으로 셀룰로오스 분해 효소를 생산 하는 세균으로 알려져 있으며, 셀룰로오스를 분해하는 효 소를 생산하는 세균으로도 사용된다.

S. xylosus의 경 우 일반적인 셀룰로오스 분해 미생물은 아니지만 탄수화 물을 영양원으로 하는 병원성 세균이다.

B. subtilis의 경우 셀룰라아제를 가지고 있기 때문에 나노셀룰로오스 현탁액에 접종되었을 때, 셀룰라아제에 의한 나노셀룰로 오스 분해가 진행된 것으로 판단된다. S. xylosus의 경우 B. subtilis처럼 셀룰라아제 활성이 높지 않지만 셀룰라 아제를 가지고 있어 B. subtilis와 같이 나노셀룰로오스 분해에 의해 점도 저하를 발생시킨 것으로 판단된다.

3.2 페녹시에탄올이 첨가된 나노셀룰로오스의 미생물 오염 특성

페녹시에탄올이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 오염 여부를 확인한 결과를 Table 1에 나타내었다. 고체배지 에 배양한 미생물의 콜로니는 생균수 측정이 가능한 30

개 이상의 콜로니가 확인되었을 때, 양성으로 표시하였으 며, 페녹시에탄올을 0.4% 첨가하였을 때, 고체배지에서 대부분 유의미한 콜로니 수가 확인되었다. 0.8%가 첨가 되었을 때, S. xylosus의 경우에는 콜로니 수가 줄어드는 것이 확인되었지만, B. subtilis의 경우에는 0.4%를 첨가 하였을 때와 비슷하게 확인되었다. 페녹시에탄올을 1.2%

이상 첨가하였을 때 두 미생물 모두 콜로니 수가 감소하 였으며, 1.8%가 첨가되었을 때에는 10개 이하의 콜로니 만 확인되었다.

페녹시에탄올은 의료, 화장품용으로 사용되는 방부제로 그람 음성균, 그람 양성균, 진균, 효모에 대해서 항균 또 는 생육을 억제하는 것으로 알려져 있다. 페녹시에탄올은 주로 세포막을 파괴하여 세포 내 물질 누출을 제어하지 못하도록 하여 항균능력을 발휘한다.

특히 박테리아 의 경우 TCA회로의 효소 억제를 통해 항균능력을 발휘한 다. 이러한 이유로 나노셀룰로오스 현탁액에 페녹시에탄 올이 첨가될 경우와의 생장을 억제하여 결과적으로 나노 셀룰로오스를 분해하는 효소를 분비하지 못하도록 한다.

페녹시에탄올이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 오염 후 잔류하는 점도 측정 결과를 Fig. 3에 나타내었다. 점 도 측정결과 B. subtilis가 S. xylosus보다 더 크게 점도 가 감소한 것으로 확인 되었다. 특히 S. xylosus의 경우 에는 페녹시에탄올이 1.2% 이상 첨가된 경우 Table 1에 나타난 결 과와 같이 나노셀룰로오스가 분해되지 않는 것으로 판단된다. 하지만 S. xylosus의 경우 Table 1에 서 오염이 확인되지 않았지만 점도 측정 결과 일부 분해 되어 점도가 감소한 것으로 판단된다. 두 결과로 미루어 볼 때, 보존제로 페녹시에탄올을 1.2% 이상 첨가하여 나 노셀룰로오스 현탁액을 제조할 경우 두 미생물 오염을 Fig. 2. Viscosity of contaminated nanocellulose

by bacteria.

Fig. 2. Viscosity of contaminated nanocellulose by bacteria.

3.2 페녹시에탄올이 첨가된 나노셀룰로오스의 미생물 오염 특성

페녹시에탄올이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 오염여부를 확인한 결과를 Table 1에 나타내었다. 고체배지에 배양한 미생물의 콜로니는 생균수 측정이 가능한 30개 이상의 콜로니가 확인되었을 때, 양성으로 표시하였으며, 페녹시에탄올을 0.4% 첨가 하였을 때, 고체배지에서 대부분 유의미한 콜로니 수가 확인되었다. 0.8%가 첨가되었 을 때,

의 경우에는 콜로니 수가 줄어드는 것이 확인되었지만,

의 경우에는 0.4%를 첨가하였을 때와 비슷하게 확인되었다. 페녹시에탄올을 1.2% 이 상 첨가하였을 때 두 미생물 모두 콜로니 수가 감소하였으며, 1.8%가 첨가되었을 때 에는 10개 이하의 콜로니만 확인되었다.

페녹시에탄올은 의료, 화장품용에 사용되는 방부제로 그람 음성균, 그람 양성균, 진 균, 효모에 대해서 항균 또는 생육을 억제하는 것으로 알려져 있다. 페녹시에탄올은 주로 세포막을 파괴하여 세포 내 물질 누출을 제어하지 못하도록 하여 항균능력을 발

휘한다.

특히 박테리아의 경우 TCA회로의 효소 억제를 통해 항균능력을 발휘한

다. 이러한 이유로 나노셀룰로오스 현탁액에 페녹시에탄올이 첨가될 경우와의 생장을 억제하여 결과적으로 나노셀룰로오스를 분해하는 효소를 분비하지 못하도록 한다.

Fig. 3. Viscosity residual rate of contaminated nanocellulose with phenoxyethanol by S.

xylosus and B. subtilis.

Table 1. Microbial contamination of nanocellulose with phenoxyethanol (+++:

colony>300, ++: 300>colony>150, +: 150>colony>30: -: colony>30）

S. xylosus B. subtilis

Blank +++ +++

Phenoxyethanol

0.4% ++- ++-

0.8% +-- ++-

1.2% --- ---

1.8% --- ---

페녹시에탄올이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 오염 후 잔류하는 점도 측정 결과 를 Fig. 3에 나타내었다. 점도 측정결과 B. subtilis 가 S. xylosus 보다 더 크게 점도 가 감소한 것으로 확인 되었다. 특히 S. xylosus 의 경우에는 페녹시에탄올이 1.2%

이상 첨가된 경우 Table 1에 나타난 결과와 같이 나노셀룰로오스가 분해되지 않는 것으로 판단된다. 하지만 S. xylosus 의 경우 Table 1에서 오염이 확인되지 않았지만 점도 측정 결과 일부 분해되어 점도가 감소한 것으로 판단된다. 두 결과로 미루어볼 때, 보존제로 페녹시에탄올을 1.2% 이상 첨가하여 나노셀룰로오스 현탁액을 제조할 경우 두 미생물 오염을 방지할 것으로 판단된다.

Fig. 3. Viscosity residual rate of contaminated nanocellulose with phenoxyethanol by S. xylosus and B. subtilis .

Table 1. Microbial contamination of nanocellu- lose with phenoxyethanol

S. xylosus B. subtilis

Blank +++ +++

Phenoxyethanol

0.4% ++- ++-

0.8% +-- ++-

1.2% --- ---

1.8% --- ---

+++: colony>300, ++: 300>colony>150, +: 150>col-

ony>30: -: colony<30.

펄프·종이기술 50(4) 2018

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방지할 것으로 판단된다.

3.3 1,2-헥산디올이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 미생물 오염 특성

1,2-헥산디올이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 오염 여부를 확인한 결과를 Table 2에 나타내었다. 1,2-헥산 디올이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액에서는 모든 농도 에서 미생물 오염이 확인되었다. 특히 페녹시에탄올은 1.2% 이상 첨가될 경우 미생물 오염이 확인되지 않는 반 면, 1,2-헥산디올의 경우 1.8%를 첨가한 경우에도 미생 물 오염이 확인되었다.

1,2-헥산디올이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 오염 후 잔류하는 점도 측정 결과를 Fig. 4에 나타내었다. 점 도 측정결과 S. xylosus가 B. subtilis보다 더 크게 점도 가 감소한 것으로 확인 되었다. 페녹시에탄올이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 오염 후 점도 측정결과를 비교 했을 때, S. xylosus의 경우 더 분해된 것이 확인 되었으 며, B. subtilis의 경우에는 잔류하는 점도가 높게 확인되

었다. 1,2-헥산디올이 1.2% 이상 나노셀룰로오스 현탁액 에 첨가되었을 때, B. subtilis의 경우 오염은 확인되지 만 보존제에 의해 나노셀룰로오스 분해에 어려움이 있는 것으로 판단된다. 하지만 S. xylosus의 경우 B. subtilis 보다 보존제에 의한 영향을 적게 받아 점도가 더 크게 감 소한 것으로 판단된다.

1,2-헥산디올은 1,2-알칸디올계 화합물로, 알칸디올계 화합물이 세균 등의 미생물에 대해 항균력을 보이는 이유 는 세균의 세포막 형성과정을 방해하기 때문으로 알려져 있다. 이전 연구에서 세균에 대해 1,2-헥산디올의 방부 력을 측정한 결과 첨가 농도에 따라 균의 성장을 억제하 였으나, 완전히 균이 성장을 억제하지 못하는 것이 확인 된 바 있다.

또한 세균에 따라서 균의 성장에 대해 매우 약한 억제력을 보이기도 한다. 이 때문에 1,2-헥산디올은 단독으로 사용하여 항균능력을 발휘하는 것보다 다른 보 존제와 함께 사용하여 그 능력을 극대화하는 것이 연구 되고 있다.

이러한 연구 결과를 바탕으로 본 연구의 결 과에서도 완전한 균 성장 억제력을 보이지 않았으며, 1,2-헥산디올을 1.6% 첨가하였을 때 오염은 있으나, 점 도 저하를 방지할 수 있었다.

3.4 아지드나트륨이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 미생물 오염 특성

아지드나트륨이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 오염 여부를 확인한 결과를 Table 3에 나타낸 결과 아지드나 트륨이 첨가된 모든 나노셀룰로오스 현탁액에서 미생물 오염이 확인되었다. 이는 1,2-헥산디올과 마찬가지로 두 미생물이 아지드나트륨에 대해 큰 저해를 받지 않기 때문 으로 판단된다.

아지드나트륨은 질소 3개가 이중결합으로 연결되어 있

Fig. 4. Viscosity residual rate of contaminated nanocellulose with 1,2-hexanediol by S.

xylosus and B. subtilis.

Fig. 4. Viscosity residual rate of contaminated nanocellulose with 1,2 hexanediol by S. xylosus and B. subtilis.

3.4 아지드나트륨이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 미생물 오염 특성

아지드나트륨이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 오염여부를 확인한 결과를 Table 3에 나타낸 결과 아지드나트륨이 첨가된 모든 나노셀룰로오스 현탁액에서 미생물 오 염이 확인되었다. 이는 1,2-헥산디올과 마찬가지로 두 미생물이 아지드나트륨에 대해 큰 저해를 받지 않기 때문으로 판단된다.

아지드나트륨은 질소 3개가 이중결합으로 연결되어 있는 질소 화합물로 생물에 대 해 독성 물질이며, 박테리아의 유전자 변이를 일으켜 세균을 제거한다.

하지만 페녹 시에탄올과 1,2-헥산디올과 다르게 인체에 대해 유해성이 보고된바 있으며, 이 때문 에 일부 세균을 제거하는데 사용되는 용도 외에 화장품 등의 용도로 사용되지 않는 다.

아지드나트륨은 특히 효소당화 공정에서 오염을 방지하기 위한 방부제로 사용된 다. 하지만 아지드나트륨의 독성으로 인해 당화용액을 발효하는 과정에서 저해요소로 작용하여 효소당화 연구에만 사용되고 있다.

아지드나트륨은 세균을 제거하는데 사 용되지만, 그 효과는 미생물의 종류에 따라 크게 달라진다. 특히 진균을 제거하는 용 도로는 적합하지 않다는 보고가 있으며, 세균 중에서도 아지드나트륨에 의해 억제되 지 않는 세균도 많다. 이러한 연구결과를 바탕으로 본 실험에 사용된 세균은 아지드 나트륨에의해 성장이 억제된 것이 확인 되었지만, 그 효과는 1,2-헥산디올과 비슷하 게 확인 되었다. 때문에 1,2-헥산디올처럼 아지드나트륨은 단독으로 사용되는 것이 아닌 다른 보존제와 함께 사용되어야 하는 것으로 판단된다.

Table 2. Microbial contamination of nanocellu- lose with 1,2-hexanediol

S. xylosus B. subtilis

Blank +++ +++

1,2 Hexanediol

0.4% +++ +++

0.8% +++ ++-

1.2% ++- ++-

1.8% +-- +--

+++: colony>300, ++: 300>colony>150, +: 150>col- ony>30: -: colony<30.

Table 3. Microbial contamination of nanocellu- lose with sodium azide

S. xylosus B. subtilis

Blank +++ +++

Sodium azide

0.4% +++ +++

0.8% ++- ++-

1.2% ++- ++-

1.8% +-- +--

+++: colony>300, ++: 300>colony>150, +: 150>col-

ony>30: -: colony<30.

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송우용·박태현·전소영·성현아·신수정

하였으며, 1.6%를 첨가한 경우에도 10% 이상 점도가 감 소하였다. 아지드나트륨을 첨가하는 경우 보존제를 첨가 하지 않은 나노셀룰로오스 현탁액에 비해 점도 감소 수준 이 낮지만, 다른 보존제에 비해 미생물 오염을 방지하는 데 어려운 것으로 판단된다. 특히 1,2-헥산디올의 경우 S. xylosus의 경우에만 1,2-헥산디올에 영향을 덜 받는 것으로 확인되었으나, 두 미생물 모두 아지드나트륨에 대해 다른 두 보존제보다 보존 능력이 떨어지는 것으로 판단된다.

4. 결 론

본 연구에서는 나노셀룰로오스 현탁액의 미생물 오염에 의한 물성 저하와 이를 방지하기 위해 보존제를 사용하여 미생물 오염을 방지하고자 하였다. 나노셀룰로오스 현탁 액을 보존제 없이 미생물 오염에 노출하게 되면 점도적 특성이 매우 저하되는 것이 확인됐으며, 이를 방지하기 위해 보존제가 필요하다.

보존제를 첨가한 나노셀룰로오스 현탁액을 미생물 오염 에 노출시켰을 때, 가장 효과가 좋은 것은 페녹시에탄올 로 확인되었으며, 1,2-헥산디올, 아지드나트륨 순으로 보 존 효과가 우수하였다. 페녹시에탄올의 경우 1.2% 이상 첨가된 경우 미생물에 의한 점도 저하 문제를 확인할 수 없었다. 1,2-헥산디올, 아지드나트륨을 보존제로 사용한 경우 1.6% 농도로 첨가하였을 때, 미생물에 의한 오염을 방지하기 위해서는 보존제 함량을 1.6% 이상 첨가해야 할 것으로 판단된다.

사 사

이 논문은 2017년도 정부(교육부)의 재원으로 한국연구 재단의 지원을 받아 수행된 기초연구사업임(No. NRF- 2016R1D1A1A09916310).

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하지만 페 녹시에탄올과 1,2-헥산디올과 다르게 인체에 대해 유해 성이 보고된 바 있으며, 이 때문에 일부 세균을 제거하는 데 사용되는 용도 외에 화장품 등의 용도로 사용되지 않 는다. 아지드나트륨은 특히 효소당화 공정에서 오염을 방 지하기 위한 방부제로 사용된다. 하지만 아지드나트륨의 독성으로 인해 당화용액을 발효하는 과정에서 저해요소 로 작용하여 효소당화 연구에만 사용되고 있다.

아지드 나트륨은 세균을 제거하는 데 사용되지만, 그 효과는 미생 물의 종류에 따라 크게 달라진다. 특히 진균을 제거하는 용도로는 적합하지 않다는 보고가 있으며, 세균 중에서도 아지드나트륨에 의해 억제되지 않는 세균도 많다. 이러한 연구결과를 바탕으로 본 실험에 사용된 세균은 아지드나 트륨에의해 성장이 억제된 것이 확인되었지만, 그 효과 는 1,2-헥산디올과 비슷하게 확인되었다. 때문에 1,2- 헥산디올처럼 아지드나트륨은 단독으로 사용되는 것이 아닌 다른 보존제와 함께 사용되어야 하는 것으로 판단 된다.

아지드나트륨이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 오염 후 잔류하는 점도 측정 결과를 Fig. 5에 나타낸 결과 S.

xylosus와 B. subtilis 모두 점도가 감소하였고 그 정도 는 비슷한 수준으로 감소하였다. 앞에서 사용한 페녹시에 탄올과 1,2-헥산디올은 낮은 농도가 첨가되었을 때, 미 생물 오염에 의한 점도 저하가 컸다. 하지만 농도가 증가 함에 따라 오염에 의한 점도 감소가 적거나 확인되지 않 았다. 하지만 아지드나트륨을 첨가한 나노셀룰로오스 현 탁액의 경우 다른 보존제를 첨가한 경우보다 점도가 감소 Fig. 5. Viscosity residual rate of contaminated

nanocellulose with sodium azide by S.

xylosus and B. subtilis.

S. xylosus B. subtilis

blank +++ +++

Sodium azide

0.4% +++ +++

0.8% ++- ++-

1.2% ++- ++-

1.8% +-- +--

아지드나트륨이 첨가된 나노셀룰로오스 현탁액의 오염 후 잔류하는 점도 측정 결과

를 Fig. 5에 나타낸 결과 S. xylosus 와 B. subtilis 모두 점도가 감소하였고 그 정도

는 비슷한 수준으로 감소하였다. 앞에서 사용한 페녹시에탄올과 1,2-헥산디올은 낮은

농도가 첨가되었을 때, 미생물 오염에 의한 점도 저하가 컸다. 하지만 농도가 증가함

에 따라 오염에 의한 점도 감소가 적거나 확인되지 않았다. 하지만 아지드나트륨을

첨가한 나노셀룰로오스 현탁액의 경우 다른 보존제를 첨가한 경우보다 점도가 감소하

였으며, 1.6%를 첨가한 경우에도 10% 이상 점도가 감소하였다. 아지드나트륨을 첨가

하는 경우 보존제를 첨가하지 않은 나노셀룰로오스 현탁액에 비해 점도 감소 수준이

낮지만, 다른 보존제에 비해 미생물 오염을 방지하는데 어려운 것으로 판단된다. 특히

1,2-헥산디올의 경우 S. xylosus 의 경우에만 1,2-헥산디올에 영향을 덜 받는 것으로

확인 되었으나, 두 미생물 모두 아지드나트륨에 대해 다른 두 보존제보다 보존 능력

이 떨어지는 것으로 판단된다.

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