대한임상병리사회지 : 제 24 권 1 호 1992
Vitek system 의 사용 경 험
서울대학교병원 임상병리과
김성권·시차자·김경애·김의종·석종성
Key words : MIC,
Patient Report1 . 서 론
Vitek system(bio Meriaux) 은 세균을 신속하고 정확하게 동정할 수 있는 자동화된 기기로， 서울대 학교 병원 임상병리과에서는 1985 년 소아병원이 개원하면서부터 사용하였다. 미생물 검사실에서 자 동화 기기를 사용하는 것은 다음과 같은 몇 가지 장점이 있기 때문이다. 첫째， 전통적인 방법이나 kit를 사용하는 것보다 검사조작이 간단하고 간면 하므로 검사에 소요되는 시간이 절약되어 일의 농 률을 높일 수 있다. 둘째， 전통적인 방법이나 kit보 다 신속하게 결과를 알 수 있으므로 환자의 진료 와 치료에 도움을 줄 수 있고 셋째， 기기가 자동으 로 반응을 판독하여 computer에 수록된 data base
를 이용하여 동정 하므로써 육안적으로 판독하는 것과는 달리 객관적인 결과를 얻을 수 있다. 이 밖 에 Vitek 기 기 를 이 용하는 장점 으로는 patient re-
port 라고 하는 독특한 보고양식이다.
이것은 다른 자동화 기기에서 받아 볼 수 있는 보고서와는 달리 MIC 농도， 투여량， 혈청 농도가 표기되어 임상의에게 많은 도움을 줄 수 있다. 저 자들은 1991. 4. 11 부터 8. 31 까지 본원 에 입 원 한 환자의 혈액 배양에서 분리된 세균 248주를 Vitek
system 으로 동정 및 항생체 최소억제농도 검사한 것을 균종에 따라 소요된 시간을 정리 분석하여 보았다.
n .
재료 및 방법동정과 항생제 최소억제농도 검사에 사용한 균 은 혈액에서 분리된 248주였으며 Bactec 6A vial 이 나 thioglycollate broth 에서 직접 혈액한천배지나
MacConkey agar에 18-24 시 간 계 대 배 양 (subcul-
ture) 하여 증식된 것을 사용하였다. 그람 양성구균 은 0.45% saline에 균을 풀어 균수를 McFarland
std No 0.5 에 맞춘 것을 사용하였고 항생제 최소억제
농도 검 사는 McF.std No 0.5 에 맞춘 균액 200 따 를 0.45 % saline 1.8ml 에 회석한 것을 사용하였다.
동정검사는 Vitek GPI card를 사용하였으며 cat- alase 성적을 표시하여 catalase 양성균은 coagu-
lase 성적을， catalase 음성균은 베타 용혈성 유무
를 표시하였다. Catalase 양성균은 coagulase 검사 를 시험관법이나 latex 법을 이용했으며， 베타 용혈 성 연쇄구균은 혈청형을 확인하기 위하여 혈청학 적 검사도 실시 하였다. 항생제 최소억제농도 검사 용 Vitek card는 catalase 양성균은 GPS SA card를
catalase 음성균은 GPS TA card를 사용 하였다.
그람 음성간균 중 발효균의 동정검사에 사용할 균 액은 McF. std No. 1 에 맞추어 사용했고， 항생제 최 소억제농도 검사는 이 균액 50 마를 0.45 % saline 1.8 ml 에 회석하여 사용 하였다. 비발효균의 동정 검사에 사용할 균액은 McF. std No. 2 에 맞추어 사 용하고 항생제 최소억제농도 검사는 이 균액 50μ L를 0.45 % saline 1.8 ml 에 회 석 한 것을 사용하였 다. 동정검사와 항생제 최소억제농도 검사용 Vitek
card에는 Kovacs 시 약으로 oxidase 검 사를 하여 성적을 표시하였다. 그람 음성간균의 동정에는
GNI card를 사용하였고 항생제 최소억제농도 검사 에는 포도당 발효균은 GNS GD card를 포도당 비 발효균 중 Ps. aeruginosa는 GNS PA card를 그 외 포도당 비 발효균에는 GNS GD card툴 사용 하였 다. Salmonella spp.
Y-
Shigella spp.로 동정 된 것 은 혈청형을 감별하기 위하여 국립 보건원에서 공급 받은 항혈청으로 혈청학적 검사를 실시하였다. 또 한 동정이 되지 않은 그람 음성 비발효균은 API20NE로 다시 동정 하였다.
ill. 결 과
Catalase 양성 그람양성 구균은 92 주였다(표 1 ).
균종 별 로는 S. aureus 26 주 ， S. epidermidis 38주，
S. hominis 5 주， S. cohnii 4 주 ， S. capitis 4 주， S.
haemolyticus 4 주 등 이 었 고， 동정 되 지 않은 것 도 7 주였다. 동정은 최초 6 시간 후부터 시작되어 15 시
간 내에 모두 완료되었다. S. aureus가 9 시간 이내 에 20주 (76.9% )가 동정되 었고 S. epidermidis는 7~
15 시간 사이에서 시간별로 큰 차이없이 동정되었 다. 전체적으로는 7~9 시간 사이에서 50.1 %로 가 장 많이 동정되었다. 그러나 동정되지 않은 균주도 7 주 (7.6% ) 있었다. Catalase 음성， 그람 양성 구균 은 24주이 다(표 2).
Table 1. Elapsed time to obtain identification results of catalase( +) Gram( +) cocci Hours S. aureus S. epideπnidis other S. spp. Unid(CNS) Total(Cumulative %)
4
-
5
-
6 2
-
2( 2.2)7 6 3 1 10(13.1)
8 7 8 4
-
19(33.8)9 5 4 8 17(52.3)
10 3 5 6 14(67.4)
13
-
7 2 5 14(82.6)15 3 11 2 16( 100 )
Total 26 38 21 7 92( 100 )
Table 2. Elapsed time to obtain identification results of catalase( -) Gram( +) cocci Hours Gr. A Strp. Gr. B Strp. Gr. D Strp. SVG Total{Cumulative %)
4 -
5 - 2 2( 8.3)
6 4 9 1 14(66.6)
7
- -
1 1(70.8)8
- -
9
-
1 1(75)10
- -
1 1 (79.2)13
-
2 2(87.5)15 - 1 1 3 ( 100 )
Total 1 4 12 7 24( 100 )
L
Gr. B 연쇄구끌은 4주 모두 6 시간 내에 동정 되 3주， E. gergoviae 1 주)， S. marcescens가 2 주 퉁이고 었다. Gr. D 연쇄구균 (E. faecium 7 주， E. faecalis 4 기타 균주(C. freundii 4주， M. morganii 4주， P. vul- 주， E. avium 1주)는 5시간 후부터 동정되어 6 시간 garis 1주， P. mirabilis 1주) 10주였다. E. coli는 4시 내에 11주 (92%) 가 동정 되었다. Streptococcus 간 후부터 동정되기 시작하여 9 시간 내에 33주
viridans group 에 속하는 균주들은 4시간 후부터 (73.3% )가 동정되었고， K. pneumoniae는 5시간 후
15시간 사이에서 콜고루 동정 되었다. 그람 음성 부터 시작하여 9시간 내에 32주 (94.1 %)가 동정 포도당 발효균은 104주가 분리 되었다(표 3). 균 되었다. 전체적드로도 9 시간 이내에 78주 (74.8%) 종별로는 E. coli가 45주， K. pnemoniae가 34주， En- 가 동정 되었다. 그람 음성 비발효균은 28주가 분 terobacter spp. 가 10주 (E. cloacae 6주， E. aerogenes 리 되 었다(표 4).
Table 3. Elapsed time to obtain identification results of glucose fermentative Gram( -) rods (Enterobacteriaceae)
Hours E. coli K. pneum Ent. spp. Ser. spp. S. typhi Y. ent Others Total(Cumulative %)
4 6 l 7( 6.7)
5 3 16
-
2 21 (26.7)6 14 10 3 4 32(57.5)
7 2 1 3(60.4)
8 3
-
3(63.3)9 8 2 1 1 12(74.8)
10 1 1 2(76.7)
13 11 2 6 1 2 1 1 23( 100 )
Total 45 34 10 2 2 1 10 10따 100 )
」
Table 4. Elapsed time to obtain identification results of glucose nonfermentative Gram( -) rods Hours P. aeru Other P. spp. A. baumannii A. lwoffi Unid Total(Cumulative %)
4 1 1 ( 3.6)
5 1 l( 7.2)
6 2 1 3(17.8)
7 3 2 5(35.7)
8 2 2
-
4(50 )9 1 1 2(57.1)
10 1 2 3(67.8)
13 1 1 (71.4)
15 1 1(75 )
18 4 1 2 7( 100 )
Total 12 4 8 1 3 28( 100 )
이 중 P. aerugiπosa가 12 주였고 기타 P. spp(P. 160 건 (64.5%) 이였고 이중 검사 당일 보고된 것은 pickettii 1 주， P. cepacia 3주) 4주 였 다. Ps. αeruginθ 81 건 (50.6% ) 이 였 다.
sa가 6 시간 이내에 3주가 동정 되었고， 9 시간 내에
는 10주 (83.~% ) 가 동정 되 었 다. A. baumannii 역 시 Table 5. Elapsed time to obtain MIC values of ca-
9 시간 내에 6주 (75%) 가 동정되어 비교적 높게 나 talase( +) and catalase( -) Gram( +) cocci
타났다. 그러나 다른 균종에서와는 달리 18 시간 후 에 동정된 것도 7주 (25%) 였다. 동정이 되지 않은 것도 3 주였다. 그람 양성구균의 항생제 최소억제농 도 검사성적은 catalase 음성， 양성을 합친 것이다 (표 5). 6시간 이내에 63주 (60%) 가 완료되었으며 9시간 이내에는 87.6% 가 완료 되었다. 그람 음성 간균의 항생제 최소억제농도 검사성적은 포도당 발효균， 비발효균을 합친 것으로 6 시간 이내에 83
주 (66.1 %)가 완료되었고 9 시간 이내에는 86.6%
완료 되었다(표 6). 전체적으로 동정과 항생제 최 소 억제농도 검사가 9 시간 이내에 완료된 것이
Hours 6 7 8 9 10 13 15 Total
MIC(Cumulative %) 63(60.0) 10(69.5) 14(82.8) 5(87.6) 3(90.4) 3(93.2) 7( 100 ) 105( 100 )
Table 6. Elapsed time to obtain MIC values of glucose fermentative and nonfer- mentative Gram( -) rods
Hours MIC (Cumulative %)
6 83(66.1)
7 11(74.8)
8 8(81.1)
9 7(86.6)
10 6(91.3)
13 8(97.7)
15 4( 100 )
Total 127( 100 )
N. 고 안
세균의 동정은 여러 가지 생화학적 시험을 통하 여 할 수 있다. 전통적인 방법이나 kit를 사용할 경우 반응이 18 시간 이상 소요되고 반응이 애매할 경우 검사자에 따라 판독 결과가 서로 달라 동정 이 힘들게 된다.
Vitek system 은 그람 양성 구균과 그람음성 포도
당 발효균， 비발효균의 동정과 항생제 최소억제농 도 검사성적을 균종에 따라 최소 4시간부터 최장 18시간 내에 결과를 얻을 수 있도록 고안된 기기 이므로 전통적인 방법이나 kit를 사용하는 것보다 신속하게 검사 결과를 임상에 제공할 수 있다. 통 상적으로 혈액 배양은 액체 배지에서 굵 증식이 의섬되면 고체 배지에 계대배양 (subculture) 하여 증식된 균 집락으로 동정과 항생제 감수성 검사를 실시한다.
Hansen 둥1) 은 세균이 증식된 액체배지로 접종
균액을 직접 만들어 Vitek system으로 신속히 균을 동정할 수 있음을 보고 하였다. 또한 Malloy 동2)은 그람 음성 간균이 중식된 혈액 배양 배지에서 직
접 Vitek system으로 신속히 균 동정 을 할 수 있음
을 보고 하였고， 배와 김 3)은 Bactec 기기를 이용한 혈액배양에서 균이 증식한 Bactec vial에서 직접
Vitek card에 혈액을 접종하여 결과를 보고한 바
있다. 정과 이 동4)은 그람 음성 간균이 증식된 혈 액 배양 배지에서 직접 Vitek card에 접종하여 신 속 동정한 결과를 보고 하였다.
Catalase 양성 그람양성 구균 중 S. aureus는 9 시 간 이내에 20주 (76.9% )가 동정되어 S. epider-midis (1 5주/39.5%) 나 다른 Stapylococcus spp. (1 3주/6 1.9
%)보다 빨리 동정되었다(표 1). 그러나 포도구균
의 경우 coagulase 검사를 시험관법으로 하면 디-음 날 동정 결과가 나온 후 다시 coagulase 결과를 입 력시켜야 하므로 결과를 빨리 알 수 있는 latex 법 을 이용하는 것이 좋다고 생각 되었다. Gr. B 베타 용혈성 연쇄구균은 4 주 모두가 6 시간 내에 동정 되었다. Gr. D 연쇄구균도 6 시간 이내에 11 주 (9 1.7
%)의 높은 동정률을 보였고 1 주만 15 시간 후에 결과를 얻을 수 있었다(표 2).
기타 알파 용혈성 연쇄구균은 6 시간부터 15 시간 사이에서 동정되어 균총에 따라 많은 시간 차이릎 보였다. 또 9 시간 이내에 연쇄구균이 79.2% 가 동 정되어 포도구균 (52.3%) 에 비해 빠른 것으로 나 타났다. 하지만 본 조사에 이용된 연쇄구균 전체의 절반이 Gr. D 연쇄구균이었고 이 균의 9 1.7% 가 9 시간 이내에 동정되었기 때문에 균수가 적은 다른 연쇄구균과의 관계는 좀더 비교해 보아야 할 것이 다. 그람 음성 포도당 발효균은 E. coli
,
K.pneumoniae가 9 시간 이내에 각각 33 주 (73.3%) ， 32
주 (94.1 %) 동정되어 다른 균종(1 2주/48%) 에 비 하여 빨리 동정 되었다(표 3).
전체적으로는 9 시간 이전에 78 주 (74.8% )가 동 정되어 정과 이 동4) 이 혈액배양 배지에서 그람음 성 간균이 증식된 배양액을 Vitek GNI card에 직 접 접종하여 얻은 결과 (71 %)와 거의 일치하였다.
포도당 비발효균의 동정은 통상의 생화학적 반응 이 음성이거나 느리기 때문에 5) 포도당 발효균에 비해 동정에 다소 시간이 오래 걸릴 것이라 생각 하였으나 동정 이 까다롭지 않은 Ps. aeruginosa와 A. baumannii는 비교적 빨리 동정 되었다. Ps. aeru- ginosa는 4시 간 후부터 시 작하여 9 시 간 이 내 에 10
주 (83.3%) 가 동정되었지만 다른 Pseudomonas spp.
(P. pickettii 1 주， P. cepacia 3 주)는 모두 18시 간 후 에 결과를 얻어 Pseudomonas spp. 의 균종간에도 동 정에 소용되는 시간이 상당한 차이가 있을 것으로 생각 되었다(표 4).
A. baumannii도 9 시간 이내에 6주 (75%) 가 동정 되어 높이 나타났다. 다른 포도당 비발효균의 동정 에 소요되는 시간은 분리된 균수가 너무 적어 많 은 균주로 검사를 더 해 본 후에 분석해 보아야 할 것 이 다. Vitek GNI card로 동정 이 안된 것 (3주) 은 API 20NE로 다시 검사해 본 결과 V. fluvialis
,
P. Paucimobilis
,
A. sorbria로 각각 동정 되 었다. Vi- tek system의 항생 제 최 소 억 제 농도 검 사는 Mac-Lowry와 Marsh6), Gerlach7) 가 보고한 microdilution 법을 기초로 하여 자동화 시킨 것이다. 그람 양성 구균의 항생제 최소억제농도 검사는 9시간 이내에 87.6% 가(표 5), 그람 음성 포도당 발효균과 비발
1f_i[.g. 86.6%.£(1±. 6)
y-E.}Y.
~ ~}o]7} ~~q..::Lc-1'-t .::L'if0J=-"a .::r-TI-.g. 63T-C60.0%), .::L'if%-"a {1-i[.g. 83T-(66.1%)7} 6-"]{l- oJt.HoJl ~.li:£]~ if
~oJl ~7-ll ~ 01 ~ 4i'-i>l-7ll ~~-~- ~% "1=- ~~ q-.
~-:AcJ i:J !.}9-} tiJ-J-~ AJ1 ~ ~ Q:j AJ1 * £ i:J !.} 7} 9J.1 {}: 01 t.HoJ1 ~.li~ -?;! oj 160{!(64.5%)<Xl..ll oj -'5- i:J-"}
t:J-~ .!i!_..ll~ ?;!.g. 81{!(50.6%)a]<Xlq-.
~-"J- ~ ~ -2-lf--"1 {1-.g. 8-"l {1-oj;r.j ~ ~ ~ -"}{1 t.H.9.J -"]~}All -2-.!f-5!.. ~-?:1°1 ~-"}~oJ1 -"J-T-i>}.C -"]
{1-.g. 10-"l {l-o] E...£ ~-2- ~-"1 Vitek.£..£ %=-:Acl ~
tiJ-;.~ All ~ ~ Q:j All*£ ~ -"}~ ~ 75-9- ~_a_~ -"1 {}:
a] 9-"l{l- ;;tJ.:s:_J:ti ~-"}~ t:J-~oJl .!i!...ll7} 7}-'6=-i>]-q.
160{!
*
81Z:!l?l- t:J-~ .!i!...ll~ -?:I~.g. {l!.}~ ~711 -"l ~~ -?;!a] 7}7-J- @- oj %<Xl..ll _£JL ~. ~_a_~ %if-*~.9.1 t:J-~ -2-.!f-5!.. ;;tJ -"J-~ .£_.£. ~ -"}~ -~ 8"~ ~
"1=- ~
-c
75-9-. %:Acl.i!} tiJ-J-~ All ~ ~ Q:j All*£ {l !.}{}:.9.1
~..9..~ J.j{l-.9-j ~~j{l. i:l-"}~31}oJl .:}7}i;l-"}t+75-9-, ~7-} ;;tcJ.!i!_ ~ i2'l ~ "l=-5!.. patient report-~- ~i2'l
~ "1=- ~-c 75-9- %O]~q.
V . =
:7:t~ ~ -ToJJ J.-j A-j 7-}~.g_ 1:}%31} ~.g_ ~ 31}~ <f! ~
q.
1. 1! ~~ ~ l:IJ-~ a]
Y.
kit.£ %.7S ~ 75-9- 18-48-"1 TI-
1:111 °J=% %1] al: -5}7-]lfr Vitek.2..£ {l J.}~~ 3:1} catalase 0J=-"J .:2 'if 0J=-"a .:rz-TI-.g. 52.3%
7}, catalase %-"a .::z_<g- 0J=-"a-TTI-.g. 75%, :1..
'if%-"J ~1f_i[.g. 74.8%, 1:3] ~1f_i[.g. 57.1%
7} 9J.l {}: 01 t.H oJl ~-.?S :£1 ~
q.
2. tiJ-J-~All ~~<2:JAJ1*£ 7aJ.}.C 1!~~~ l:IJ-~oJ
t+ kit~ -"}% ~ 75-9- 18-"l
n
l:IH 0J=51l °F -5}'-t, Vitek.2..£ {l !.} ~ ~ 31l- .:2 'if 0J=-"a TI-.g. 87.6%7}, .::L 'if %-"a i[.g. 86.6% 7} 9-"l
n
oj t.H oJl {l!.} ~ .li :£] ~
q.
3. ~ ±-"}oJl J.-j 1! ~~ ~ l:IJ-~ .2..£ ~ J.} ~ 75-9- 24-48J.]{l- +oJl .!i!...ll~ 9- ~~~ 1!%
Vitek system% J.}%t>]-E...£J.-] 32.5%~ {jJ.}
t:J-~ .!i!...lli[ "1=- ~~q.
The Using Experiment of Vitek System
Kim, S. G., See, C. J., Kim, K. A., Kim, E. J., Suk, J. S.
Dept. of Clinical Pathology, Seoul National University Hospital
ABSTRACT
Vitek system, a fully automated in vitro testing system designed for identification and antimicrobial susceptibility test of microorganisms was introduced to The Seoul National University Hospital in 1985.
Principal advantages of using this system are rapid identification of microorganisms and rapid reporting of the minimal inhibitory concentration values.
Using Vitek system, 248 isolates from culture re- quested blood specimen in our hospital from April 11. 1991 to August 31. 1991 were identified and minimal inhibitory concentration test were per-
formed. We summarized the data and obtained results as below.
1. 52.3% of catalase +, Gram ( +) cocci, 75% of catalase(-), Gram(+) cocci, 74.8% of Gram (-) glucose fermenters and 57.1% of glucose nonf ermenters were identified within 9 hour.
2. Mic values of 87.6% of Gram ( +) cocci ( cata- lase +,- ) and 86.6% of Gram ( - ) rods (glu- cose fermenters and nonfermenters) were ob- tained within 9 hour.
3. 32.5% of isolated organisms were reported within the test performed day by using Vitek system.
REFERENCES 1. Hansen SL, Stewart BJ and henry K: BACTEC
460, Vitek AMS and Abbott MS-2 for direct identification and susceptibility testing of blood cultures. Proc. Ann. meeting Am. Soc. Microbi- al. 259, 1982.
2. Malloy P J, Ducate MJ and Schreck en berger PC : Comparision of four rapid methods for identifi- cation of Enterobacteriaceae from blood cul- tures. J. Clin. Microbiol. 17 : 493, 1983.
3. l:lij ~ ~' ~ J8-~
:
Blood cultureoJl"-i
7-}%~ 7]7]~ 0
1%
~{}4f %78
~ oJltl-t>]-0:1.
o]J-~% ~ J.j-~~ &~, "-i%*0J-~~' 1990.7.13.
4. 78%-"~, ~78~, 0]1}-~: .:§:.7]-"J .::z.'if%-"J ;j-TI-
0] %--6l-'tl ~ ~ l:lij 0J= l:lij
Al
~ Vitek GNI card ~{} 1j~oJl ~~ TI-~9.1
{}4f
%;Aj. q]~o]-"~%Q:}-:§:17-l, Vol. 26, No.2, 1991.
5. Washington J A : Blood cultures ; An overview.
Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. dis. 8 : 803, 1989.
6. MacLowry, J.D. and Marsh, H. H.,: Semi-Auto- matic Microtechnique for Serial Dilution Antibi- otic Sensitivity testing in the clinical Laboratory, Journal of Laboratory Clinical Medicine, 72 : 685-687, 1968.
7. Gelach, E. H., Microdilution 1 : A Comparative Study, pp.63-76, Current Techniques for Anti- biotic Susceptibility Testing, A. Balows(ed.), Charles C. Thomas, Springfield, Illinois, 197 4.
