임상병리검사과학회지 : 제 27권 제 1 호
1995.
요침사의 확인검사
서울중앙병원 임상병리과 검덕희·박선영·백병윤·민원기
Confirmed Tests of Urine Sediments
Kim , Duck Hee. , Park , Sun Young. , Baik , Byung Yoon. , Min , Won Ki De pt.ol
αrinic따 P따hology，As an
Medic따Center
Identification of urine sediments is not able to dip strip tes
t.For determination of cell and crystal in urine we survey urine sediments by microscopy.
In the most clinical laboratories take unstained wet smear microscopic test under bright field. But identification of cell and crystals is not enough under bright field.
Therefor , we must do confirm test for identification of cell and crysta
l.In this report , we introduced several method that take effect in routine laboratory.
The methods are as follows ;
1.By special microscope
Phase contrast microscope is useful for identified cast and dysmorphic RBC with the chang- ing of refractive index.
Polarize microscope is useful for the oil droplets , oval fat body and crystals.
For example , as property of cholesterol and cholesterol ester is birefringence , it showes mal- tese - cross pattern by using polarized microscope.
Interferance contrast microscope is sterographic observation of the urine sediments.
2. By staining method
Sternheimer stain(modified) method distinguish cells. Cytoplasm is stained red color with pyronin B , nuclear is stained blue color with alcian blue.
Sudan m or Oil red - 0 dyes can stain oil droplets and oval fat body from orange to red color. Lugol stain method distinguish glycogen containing cells.
Papanicolaou stain method is good for discrimination of cells and preservation of slides.
3. Determination of crystals in urine
This method is utilization of specific character , solubility and observational typical shape Key words : confirmed tests of urine sediments
- 256-
I. 서 론 다. 또한 초자원주체의 기질인 mucoprotein의 경우 요 와 동일한 굴절률을 나타내므로 명시야검경시에는 놓 요검사 중 시험지봉검사와 병행하여 실시되는 요침 철 위험이 있으나 위상차현미경에서는 뚜렷하게 나타 사검경은 요 중의 세포성분과 원주 및 결정을 조사함 난다. 또한 새포내의 핵은 입체적으로 강조되므로 백 으로써 이와 관련된 질환을 진단 할 수 있는 검사이 혈구 및 상피세포 등의 관찰이 용이해진다. 세균에서
다. 는 흑색의 contrast를 가지므로 무결정성염류(무정형인
시험지봉 검사에 의한 잠혈반응이나
leukocyte ester-
산염， 무정형요산염 등)와의 감벌이 용이하고 적혈구ase
검사로는 적혈구나 백혈구의 요중 존재만을 짐작 는 중앙부위가 강조되므로 효모나 지방구와의 감별이 할 수 있으나， 요침사검경은 상피세포계와 선장으로부 용이하다.터 유래되는 각종 원주체의 유무확인과 그 종류를 감
별하고， 요 중의 각종 결정체 및 세포의 종류나 양을
2)
편광장치현미경을 이용한 겸경 (polarized-light
확인하여 여러 가지 신장 및 요로질환을 진단 할 수microscopic view)
있으므로 경험이 많은 검사자에 의해 신중하게 검사되 편광장치현미경은 광학적 이방체인 지방성분， 일부 어야 한다. 결정체성분 (calcium
oxalate
, 요산， 요산염 ) 및 이들을 요침사의 감별은 현재 많은 검사실에서 습윤봉입 함유한 원주체를 관찰하는데 좋다. 특히 유용성이 높(wet
mount) 표본을 명시야에서 관찰하여 감별하고 있 은 요침사성분으로 지방구가 있고 난원형지방체나 지으나， 일반광학현미경의 명시야검경에서는 결정체의 방원주체내에는 특징적인
maltese
cross가 관찰된다.경우 검체에 따라 다양한 모양으로 변형이 일어나고， 또 명시야검경상에서 적혈구와 감별이 어려운
calcium
세포의 감별， 특히 상피세포계의 신세뇨관상피세포， 대oxalate
결정체를 확인하는데 사용된다.식세포， 봉입체 함유세포， 난원형지방체 및 이형세포
등의 감별이 어렵고， 통상적으로 보고되는 백혈구와
3)
간섭차현미경을 이용한 검경 (differentialinter-
적혈구마져 혼동을 일으키는 경우가 많이 있으므로 광ference contrast microscopic view)
학현미경적 검사를 보환하는 다른 방법이 병행되어야 간섭차현미경은 위상차현미경과 편광현미경의 원리
한다. 를 발전시켜 개발된 현미경으로 평면으로만 보이던 물
본 논문에서는 요침사 검경시 관찰되는 세포와 결정 체를 입체감있게 보이게 한다. 이 현미경은 명시야검 체의 감별을 확인 할 수 있는 방법 중 임상병리과에서 경중 지나치기 쉬운 원주체， 적혈구， 백혈구， 상피세포 쉽게 도입할 수 있는 몇가지 방법을 살펴보았다. 및 아미노산 결정체나 세균의 감별에 좋고 착색뇨의 침사감별시 유용하다. 간섭차현미경은 일반요침사검경 II. 재료 및 방법 에 많이 사용되는 방법은 아니나 물질의 구조적 세부 검사를 통한 정확한 세포의 형태관찰에 활용 할 수 있 1. 특수현미경을 이용한 검사방법 다.
1) 위상차현미경을 이용한 검경 (phase-contrast
mi- 4)
전자현미경을 이용한 검경croscopic view)
전자현미경은 신장조직 생검시 주로 사용되는데 이위상차현미경은 일반광학현미경으로 관찰하기 어려 때 신세뇨관에서 발견되는 원주는 진단상에 중요한 정 운 앓고 무색투명한 침사성분을 관찰하는데 적합하다. 보를 제공한다. 전자현미경은 투과형전자현미경 (trans- 위상차현미경에서는 세포의 세밀한 부분을 가시적 염
mlsslon electron microscopy :
TEM) 과 주사형전자현미 색에 의해 보여주므로 세포간의 구별을 쉽게 할 수 있 경 (scanningelectron microscopy:
SEM) 이 있으며 주로 SEM은 심도있는 원주의 미세구조를 보여준다. 최 하여 침사액에 1--2방울 떨어뜨려
5--
10분간 염색한 근 요원주에 대해서는 특히 SEM이 많이 이용되고 있 후 검경한다.는데 이는 원주의 형태， 구성성분 등을 구별하여 임상 백혈구의 핵은 청색， 세포질은 적자색으로 염색되고 적인 중요성을 제공하고 있다. SEM검경에서 초자원주 세포질은 염색 정도에 따라
pale cell
,dark cell
,glitter
는 기질이 부드러운 표변인 것과 꼬인 표변인 것 두 cell로 구분 할 수 있다. 세뇨관상피세포는 적자색의 종류로 보여지며， 과립원주는 기질위에 과립이 포매된 세포질을 가지며 핵은 청색으로 염색된다. 이에 따라 형식으로 보여지고， 납양원주는 무정형물질이 섬유기 무염색표본시에는 감별하기 어려운 세뇨관상피세포와 질위에 더해진 형식으로 보여지게 된다. 또 세포원주 백혈구가 Sternheimer염색에서는 쉽게 감별 할 수 있 의 경우 각기의 세포가 기질위에 부착된 모습으로 보 다. 원주체의 경우 초자원주체는 청색으로 염색되고여진다. 과립부분은 적색으로 염색되며 납양원주체는 전체가
넓은 적자색으로 염색된다. 악성세포의 핵성분은 명료
5)
형광현미경을 이용한 요침사 검경 한 청색으로 염색되어 나타난다.요중에는 자외선과 같은 단파장의 광을 조사 할 때 또 효모양진균이나 Trichomonas는 불염색성으로 나 에 장파장의 가시광선을 발하는 1 차형광이 포함된 물 타나며 결정체 등도 염색되지 않는다.
질이 있으며， 자체적인 형광은 포함하지 않아도 형광
색 소로 염 색 이 되 는 경 우가 있는데 이 를 2차형 광이 라
2) Sudan m stain (Oil red 0)
한다. 이 런 2차형 광은 형 태 학적 관찰뿐 아니 라 조직 화
Sudan m stain(Oil red
0) 은 요침 사 중 나타나는 학적으로 물체의 함유성분을 검사할 때도 응용가치가 지방구가 다른 세포나 효모， 기포 등과 혼동되는 것을있다. 요화학적인 검사시 유로빌리노겐이나 포피린체 방지하기 위하여 사용하는 염색법으로
sudan
m 염색액는 일 차형 광을 발하며
acridine
orange형 광염 색 은 세 포 으로 지 방구의 주요 성 분인cholesterol -
esterase를 염 진단에 많이 사용되는 염색법으로 요침사 감별에 유용 색하는 방법이다. 요 중의 지방은sudanophilic
dyes를 한 초생체 염색법으로 고정도말 표본에도 활용된다. 홉수하는 성질이 있어서 이들 dye로 염색했을 때or-
ange - red
color로 염색되어 감별이 용이해지는데 이때2.
염색법에 의한 검사방법 지방의 종류에 따라 cholester이일 때는 황적등색，cho-
lesterol ether
및 지방산의 경우에는 황적색， 중성지방1) Sternheimer stain
변법 은 적색， 인지질， 당지질은 담적색으로 염색된다.Sternheimer
stain은national fast
blue와pyronin
B를같이 사용하는 초생 체 염 색 법 이 다.
National fast
blue는3) Lugol stain
phthalocyanin계의 염기성 색소로 세포의 핵성분， 원주
Lugol
염색은glycogen
또는 전분 성분을 iodine과 체의 기질을 청색으로 염색시키고pyronin
B는xan-
반응시켜 청자색-갈색으로 염색하는 방법으로glyco-
thine계의 염기성 색소로 세포질， 원주체의 과립 등을 gen을 함유한 상피세포， 정자 전립선석 등이나 전분과 적자색으로 염색시키므로 백혈구와 림프구， 조직구， 형 립 또는 원충을 확인하는 방법이다. Lugol염색은 정자，
질세포， 상피세포의 감별이나 이형세포의 관찰에 도움 원충은 황갈색， 전분과립은 청자색으로 염색되며 적혈 을 준다. 이 방법은 1975년 Sternheimer가 발표한 요 구와 백혈구 등은 황색에서 다갈색으로 염색된다. 원 침사 염색법으로 그 후 일본인 顧林 등이
national fast
주체는 황색이거나 불염색성을 나타나며 세균， 효모는blue
대신alcian
blue를 이용한 변법을 발표하였다. 불염색성이다. 상피세포는 표층세포의 경우 엽은 황색염색방법은
2 % alcian blue 8 GS
수용액과 1.5 %
으로 염색되지만 심층으로 갈수록 세포내의glycogen
pyronin B
수용액을 각각 여과후 2:1 의 비율로 혼합 의 침착에 의해 황갈색으로 염색되기 때문에 편평상피- 258-
T able 1. Characteristics of amorphous and crystalline urinary sediments Urine pH
Solubility Clinical
Substance Description where found
acid alkali characteristics significance neutra
Bilirubin
다갈색의 무정형 바늘모양 마름모꼴+ alkali
,acid
,acetone
,bilirubinuria
다느 이tI바 o 체 ，혀 chloroform에 용해
Cholesterol
귀퉁이가 깨어진 모양의 앓고 편평+ + chloroform
,ether
,hot renal damage
한 무색의 판상모양 alcohol에 용해
Calcium carbonate
작은 무색의 아령모양 또는 구형+ + acetic
acid에 용해normal
Calicum oxalate
작은 무색의 팔면체， 아령모양， 원형+ + +/
HCl에 용해normal
Cystine
무색의 정육각형의 모양세균에 의해+ alkali
또는 ammoma에cystmosls
급속히 파괴된다 요산과 혼동하기 용해 쉽다
Hemosiderin
갈색의 과립덩어리+ + Prussian
blue에 의 해 청hematuria
색으로 염색된다
Hippuric acid
앓고 무색의 바늘모양 마름모꼴이나+ + + hot water
, alkali에 용해normal
사면 pnsms모양
acetic
acid에 불용Leucine
방사상의 줄무늬가 있는 노란색의+ alkali(
특히ammonia)
,liver damage
구형의 결정 HCl에 용해
aminoaciduria
tyrosine과 같이 보이 는 경 우가 많다
acetatic acid
,alcohol
, ether에 불용성Tyrosine
벗 단 또는rosette
form의 부드러 운+ alkali.
희석무기산， 끓는liver damage
바늘모양 물에 용해
aminoaciduria
alcohol
, ether에 불용성Urates calcium
,magnesium:
대부분 무정+ 60 t
alkali에 용해normal
형의 황색결정
60 t acetic
acid에 용해ammomum:
갈색의 나무열매모양+ + 60 t
alkali에 용해potassium:
각색 의 소구형sodium acid urate:
무색 의 침 상모+
양 또는 무정형
Uric acid
황색 또는 적갈색+
alkali에 용해normal
크고 다양한 모양-마름모꼴， 사방 alcoh이에 불용성
chemotherapy
형 판상모양，
rosettes form
등gout
Phosphates
무색의 3~6면으로 된 prism으로 관+ + acetic
acid에 용해normal
뚜껑모양 또는 양치류의 잎모양
세포나 이행상피세포의 심층세포감별에 아주 유용하게 방법이라 할 수 있다. 이 염색법은 세포질이 여러 염 이용될 수 있다. 료에 의해 대조적으로 염색되므로 핵의 염색성이 선명 하므로 이형세포의 관찰에 가장 적합하다.
Pap
stain은 15-20분의 단시간으로 염색이 가능하고 염색성도 좋 으며 표본을 고정후 염색하게 되므로 표본의 영구보존4) Papanicolaou stain
Pap
stain은 세포를 상세히 관찰하는데 가장 우수한이 가능한 방법이다.
3.
결정체의 감벌을 위한 검사방법요침사에서는 많은 종류의 결정체를 볼 수 있는데 그 결정은 정상적으로 존재하는 것인지 어떤 질병상태 와 유관된 결정인지를 구별하는 것이 중요하다. 요 중 출현하는 비정상결정은 주로 산성 및 중성에서 자주 나타나며 정상결정은 강산에서 알칼리까지 광범위하게 나타난다.
요침사 중에 출현하는 결정체는 요의 상태에 따라 많은 변형을 일으키며 유사한 모양이 많아 일반현미경 적 관찰로는 감별하기 어려운 경우가 있으므로 요의
pH
및 가용성을 이용하여 확인하여 보는 것이 필요하다.
Table
1.에서는 결정체가 발견될 수 있는 요의pH
와 그 가용성 및 임상적의의를 정리하였다.
m.
결론 및 고찰요의 유형성분은 백혈구， 적혈구， 상피세포 등의 세 포성분과 원주， 염류의 결정성분， 그리고 점액사 등의 기타 성분으로 크게 나눌 수 있다. 세포성분은 신장 및 요로의 염증， 종양， 순환장애， 결석， 외상 등에 의해 서 요에 출현한다. 혈구는 혈관계(주로 사구체) 상피 세포는 요로의 전과정에서 유래될 수 있으며， 근접장 기 특히 생식기계에서 각종 세포성분이 유래되어 임상 정보로서의 의의는 매우 다양하다고 할 수 있다.
요침사검경의 명시야검사는 검사방법이 간단하기는 하나 세포를 감별하기 어려운 경우가 많이 있으므로 반드시 확인검사를 병행하여 실시하는 것이 바람직하 다. 현미경적 검사에는 광학현미경보다는 위상차현미 경을 이용하여 검경하자는 의견이 높아지고 있는데，
위상차 현미경은 요와 동일한 굴절률을 나타내는 앓고 투명한 침사물 특히 초자원주체의 기질인
mucoprotem
같은 경 우에 감별 하기 가 아주 좋다. 또 흑색
contrast
와 백색 contrast로 나뉘어 보이는데， 세균의 경우에는 흑색의 contrast로 보이므로 무결정성염류(무정형인산 염， 무정형요산염 등)와의 감별이 용이해진다.
세포성분의 경우에 핵은 입체적으로 강조되므로 백
혈구， 상피세포 등의 관찰이 쉽고 적혈구는 중앙부위 가 강조되어 효모나 지방구와의 감별이 용이하다. 또 혈뇨의 경우 적혈구의 출혈부위를 판정할 수 있게 하 는
dysmorphic
RBC의 검 사에 도 유용하다.요침사는 많은 검사실에서 기본검사로 무염색 표본 관찰이 이루어지고 있으나， 무염색표본 검경만으로는 구별하기 어려운 경우가 많이 있으므로 성분의 감별，
판정을 위하여 염색법을 병행하는 것이 바람직하다.
크기， 모양， 명암 (contrast) 을 중심으로 한 무염색표본 의 관찰에 대하여 염색표본은 여기에 색조의 변화가 추가됨에 따라 관찰하기 쉽고， 판정도 용이하며， 무염 색표본에 비하여 판정의 객관성이 커지므로 관찰자간 의 판정오차가 감소될 수 있다. 또 고정후 실시하는 염색법은 영구표본으로 보존할 수도 있다.
요침사의 염색법에는 주로 초생체염색법이 많이 사 용되고 있는데 침사액이 희석되는 문제점이 있기는 하 지만 염색방법이 간단하고 염색후 단시간 내에 검경할 수 있는 장점이 있다.
요침사 염색법 중 세포의 감별을 위해서는 주로
Sternheimer stain
변 법 을 많 이 이 용하는데 ,2 % alcian
blue액은 세포의 핵성분， 원주체의 기질을 청색으로 염 색시키고， 1.
5 % pyronin
B은 세포질， 원주체의과립 등 을 적자색으로 염색시키므로， 백혈구와 림프구， 조직 구， 형질세포， 상피세포의 감벌이나 이형세포의 관찰에 도움을 준다.난원형지방체나 지방구의 감별을 위해서는 편광장치 현미 경 이 나
sudan m stain(Oil red
0) 이 권장되 고 있 는데 요침사 중 나타나는 지방구를sudan m
염색액으 로 염 색 하여 보면orange - red
color로 염 색 되 어 감별 이 용이해진다. 그외 상피세포의 심층형세포의 감별이 나 전분 등의 확인을 위해서는Lugol
stain을 실시하는 것이 유용하다. 또 고정 후에 실시하는Papanicolaou
stain은 세포질이 여러 염료에 의해 대조적으로 염색되 고 핵의 염색성이 선명하므로 세포 특히 이형세포의 관찰에 가장 적합하다.그외 염류 및 결정성분은 정상적으로 존재하는 것인 지 비정상결정인지를 구별하는 것이 중요하며， 일반현 미경적 관찰로는 감별하기 어려운 경우에는 요의
pH
및 가용성을 이용하여 현미경적으로 관찰되는 형태학- 260-
적 감별과 더불어 확인하여 보는 것이 필요하다.
REFERENCES
1. 고려의학 출판부 : Color Atlas Of Urinary Sedi-