대한임상병리사회지 : 제 24 권 1 호 1992
Ristocetin cofactor activity 에 사용하는 혈소판 제조법
서울대학교병원 임상병리과
이진숙·송운홍·한석종·조한익
1 . 서 론
1926 년 Erich von Willebrand가 가혈우병 (heredi- ty pseudohemophilia) 이 라고 보고한 이 래 von
Willebrand를 측정 하는 여 러 가지 방법 이 개 발되 어 사용되고 있다. 우리나라에서도 적지 않은 환자가 있을거라고 생각되나 von Willebrand 질환의 진단 에 특히 중요한 (ristocetin cofactor activity) 측정 용 시약이 고가이고 검사 의뢰가 적은 동 현실적인 어려움 때문에 대부분의 병원에서 시행하지 않고 있 다. 이 에 저 자들은 일정 농도의 ristocetin과 자 가제조한 혈소판으로 응집에 필요한 특이적 혈장 인자인 ristocetin cof actor (RCoF) 가 정 량 가능함을 원 리 로 하여 platelet aggregometer 기 기 를 이 용 만 족한 결과를 얻었기에 보고하고자 한다.
n . 방 법
1. 기기 및 시약
CD platelet aggrecorder
@ micropipet
@ aggrecorder용 cuvette
@ stir bar
@ timer
@ centrifuge( 4
0C)
(J) buffer : O.OlM Tris-0.01M EDTA-0.15M NaCI , pH 7.5
@ ristocetin(10 mg/m I)
@ formalin
@ bovine serum albumin
25ml을 담는다.
@ Cold 2 % formalin을 첨가한 buffer을 동량 넣 고 37
0C water bath에 서 1 시 간 incubation 한 다.
@ 4
0C 에 서 18시 간 이 상 fixation 한다.
@ 4
0C centrifuge에서 107 g로 10-15 분 원심 (RBC 제거 과정)
@ 상층을 조심스럽게 따서 다른 tube에 옮긴다.
@ 2500g로 10분 원심 후 상층액을 버린다.
(J) Cold buffer를 넣 어 재 부유 시 킨 후 2500 g로 10분 원심 (3 회 반복 washing)
@ PLT count가 2 x 1Q8/ m l가 되 도록 buffer로 조정한다.
@ 4
0C 에 보관(수 개월 사용 가능)
*주의 : 모든 조작은 4-C 를 유지하여야 한다.
3. 방 법
CD blank : cuvette에 200 μ i PL T suspension +
200 μ i buff er + stir bar를 넣 고 1 분 warming
후 baseline으로 한다.
@ STD curve : normal pool plasma를 1/2 , 1/4 ,
1/8 , 1/16 으로 dilution 한 후 400 μ i PLT
suspension에 dilution 한 plasma 50 μ 6 를 넣 고 1 분 warming 후 50 μ i ristocetin을 넣 어 각각의 slope 값을 구한다.
@ test sample : 400 μ i PL T suspepsion에 plas- ma 50 μ e 를 넣고 l 분 warming 후 ristocetin
을 넣어 slope 값을 구한다.
ill. 해 석
2. 미atelet 제조법 Normal pool plasma를 1/2 , 1/4 , 1/8 , 1/16 dilu- tion 하여 자가제조한 PL T suspension 에 넣고 1 분
CD Blood bank에서 platelet concentrate 1 unit(72 warming 후 ristocetin을 첨가하여 각각의 slope 값을 시간 이내의 것)를 얻어 50 ml plastic tube에 구하여 log-log graph에 STD curve( 표 1 참고)를
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작성 한다. Normal range는 55-170% 이 다. N. 요 약
ν ν ...
/
γ
/
니/
