대한소화기학회지 2003;42:183-189
1) 2)
접수: 2003년 3월 13일, 승인: 2003년 7월 11일
연락처: 명승재, 138-736, 서울특별시 송파구 풍납동 388-1 울산의대 서울아산병원 소화기내과
Tel: (02) 3010-3190, Fax: (02) 485-5782 E-mail: [email protected]
※본 논문의 요지는 2001년 내과 추계학술대회에서 구연 발표되었고, 2002년 Digestive Disease Week (DDW) 포스터에 발표된 내용임.
Correspondence to: Seung-Jae Myung, M.D.
Department of Internal Medicine, Asan Medical Center, University of Ulsan College of Medicine
388-1 Pungnap-dong, Songpa-gu, Seoul 138-736, Korea Tel: +82-2-3010-3190, Fax: +82-2-485-5782
E-mail: [email protected]
위암의 조기 진단을 위한 위세척액과 위조직에서 Telomerase 활성도 및 Telomerase Reverse Transcriptase 발현
울산대학교 의과대학 내과학교실, 아산생명과학연구소*
이현주․명승재․박영환․조윤경*․정훈용․이진혁․홍원선․양석균․김진호․민영일
Measurement of Telomerase Activity and Telomerase Reverse Transcriptase Expression in Gastric Fluid and Tissue for Early Diagnosis of Stomach Cancer
Hyun Ju Lee, M.D., Seung-Jae Myung, M.D., Young Hwan Park, M.D., Yoon Kyung Cho*, Hwoon-Yong Jung, M.D., Gin Hyug Lee, M.D., Weon-Seon Hong, M.D., Suk-Kyun Yang, M.D.,
Jin-Ho Kim, M.D., and Young Il Min, M.D.
Department of Internal Medicine and Asan Institute for Life Sciences*, University of Ulsan College of Medicine, Asan Medical Center, Seoul, Korea
Background/Aims: Telomerase activity and telomerase reverse transcriptase (TERT) expression have been
proposed as a marker for malignancy. However, little is known about those markers in intestinal metaplasia (IM).
This study was performed to evaluate the usefulness of telomerase activity in gastric washing fluid and TERT expression in tissue as a marker for early diagnosis of stomach cancer. Methods: Gastric washing fluid and biopsies were taken endoscopically. We examined the telomerase activity by telomeric repeat amplification protocol (TRAP) and the TERT expression by semiquantitative reverse transcription-polymerase chain reaction in 26, 21 and 15 cases of cancer, IM, and normal mucosa respectively. Results: The telomerase activity was positive in 65% of cancer, 44% of incomplete IM, and 33% of complete IM. The TERT was expressed in 89% of cancer, 81% of IM, but not in normal mucosa. The TERT expression level was higher in cancer and incomplete IM than in complete IM and normal mucosa (p<0.05). Conclusions: Telomerase activity in gastric washing fluid and TERT expression in tissue may have limited usefulness as a marker for the early diagnosis of stomach cancer.
However, the increased levels of TERT expression in IM and cancer suggest that TERT expression may be associated with carcinogenesis in stomach cancer. (Korean J Gastroenterol 2003;42:183-189)
Key Words: Stomach neoplasms; Intestinal metaplasia; Telomerase; Telomeric repeat amplification protocol;
Telomerase reverse transcriptase
대한소화기학회지: 제42권 제3호, 2003 184
서 론
위암은 우리 나라에서 발생하는 가장 흔한 암으로 위내시 경의 광범위한 보급으로 인해 조기 발견율이 높아지고 있 으며, 조기 위암의 수술 후 10년 생존율은 90% 이상이므로 위암의 조기 발견은 매우 중요하다. 위암의 전구암 병변인 장상피화생은 위점막이 대장의 원주상피로 변화하는 것으 로 점막이 매우 불규칙하여 내시경검사에서 암이 발생한 부분과 구별하기 매우 어려운 경우가 많다.1 따라서 주기적 인 내시경검사와 의심되는 병변의 조직검사가 반드시 필요 하다. 장상피화생은 조직학적 특성에 따라 Type 1, 2, 3의 세 가지 형태로 분류하고, 그 중 Type 3으로 진행할수록 위 암 발생의 위험도가 증가하는 것으로 알려져 있다.2,3
한편, 위암의 발생 과정에는 APC 유전자의 불활성화, K-ras 유전자의 활성화, c-erbB2 유전자의 증폭, p53 변이 및 DCC locus의 allelic loss 등의 유전자 변이가 관여하는 것으로 알려져 있지만, 이를 이용하여 위암을 조기 발견하 려는 검사들은 민감도나 특이도가 만족스럽지 않아 아직까 지 유용성이 증명된 검사법은 없다.4-9 유전자의 말단에 존재 하여 세포의 노화와 사멸에 관여하는 단순 반복 염기인 telomere의 길이를 유지하는 telomerase는 정상 세포에서는 활성화되어 있지 않지만, 대부분의 악성 종양에서는 그 활 성도가 증가되어 있어 세포의 악성화와 관련이 있음이 밝혀 지고 있고,10-12 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR) 방법을 이용한 telomeric repeat amplification protocol (TRAP)이 소개되면서 여러 악성 종양의 조기 발견을 위한 검사법으로 개발되고 있다.13 또한 telomerase의 catalytic subunit인 telomerase reverse transcriptase (TERT)가 알려지 면서, 이러한 실제 telomerase 활성화와 관련된 단백질을 측 정하여 악성 종양의 조기 발견에 도움을 주려는 연구가 진 행되고 있으며, 그 외에도 예후 지표로서의 유용성을 알아 보기 위한 연구도 보고된 바 있다.14 본 교실에서도 췌장암 환자의 췌액에서 telomerase 측정이 췌장암의 조기 진단에 유용함을 보고한 바 있으며,15 대장암 환자의 대장세척액과 조직에서 telomerase 활성도 및 TERT 측정의 유용성에 대 해 보고한 바 있다.16
이에 저자들은 위내시경을 시행하면서 채취 가능한 위세 척액에서 telomerase의 활성도 측정이 장상피화생에서 위암 발생의 조기 발견에 유용한 검사법으로 개발 가능한지를 알아보았다. 또한 정상과 장상피화생, 그리고 위암조직에서 TERT의 발현을 검사하여 그 의미를 알아보았다.
대상 및 방법
1. 대상서울아산병원에서 2001년 3월부터 2001년 6월까지 위내 시경을 시행한 62예(남자 35예, 여자 27예)를 대상으로 하 였고, 이 중 위암은 26예, 장상피화생 21예, 대조군 15예이 었다. 평균 연령은 위암의 경우 62±15세(42-82세), 장상피 화생은 60±13세(40-78세), 정상 대조군은 56±12세(27-74 세)였으며 각 군 간에 차이는 없었다.
2. 방법
1) 위세척액과 조직의 채취
위내시경검사시 조직검사 시행 전 50 mL 생리식염수로 세척한 후 세척액을 얻었고, 이후 조직을 얻어 -80℃에 저 장하였다. 이 때 채취한 조직은 정상 대조군인 경우 조직 3 개, 장상피화생의 경우는 정상 점막, 장상피화생, 병리확진 용 조직을 각각 3개씩 얻었고, 위암의 경우도 정상 점막, 위 암, 병리확진용 조직을 각각 3개씩 얻었다.
2) 장상피화생의 정의
장상피화생은 병리 소견과 점액 염색에 의해 세 가지 형 태로 구분하였다. Type 1은 완전형으로 점막이 잘 유지되 어 있고 Alcian blue 염색시 염색이 안되며 분홍색으로 남 아있는 경우이고, type 2와 3은 불완전형으로 점막이 불규 칙하고 crypt 형태가 분열되어 있으며 Alcian blue 염색에서 파란색으로 염색되는 경우이다.17 이 중 type 2는 술잔세포 형(goblet cell type), type 3은 대장세포형(colonic cell type) 으로 구분하였다.
3) TERT mRNA 발현의 측정
TERT는 조직에서 RNA를 분리한 후 reverse transcription- polymerase chain reaction (RT-PCR)을 시행하였고, 이 중 일부 예에서 TERT mRNA를 추출하여 반정량 분석을 시행 하였다. TERT 발현을 반정량하기 위해서 end point dilution method를 사용하였다. 우선 RNA를 분리하기 위해 조직을 녹인 후 sand 300 µL, denaturation solution 300 µL를 넣고 4℃, 10,000 rpm에서 20분간 원심분리를 하였고 chloroform/
isoamylalcohol 105 µL, phenol 500 µL, sodium acetate 50 µL를 넣고 15분간 얼음에서 반응시켰다. 이후 4℃, 10,000 rpm에서 15분간 원심분리 시행 후 상층액을 100% 에탄올 로 씻고, -70℃에서 1시간 반응시켰다. 다시 4℃, 10,000 rpm에서 30분간 원심분리 후 상층액은 버리고 70% 에탄올 로 천천히 씻은 다음 원심분리하고 건조시켰다. 0.8% gel에 서 전기영동을 시행하여 TERT 발현을 확인하였고, 일정량 의 TERT mRNA를 채취하여 2배 연속하여 희석한 RT-PCR 사진 중 TERT 밴드가 나타나지 않는 곳까지 희석한 횟수 를 정하여 반정량에 이용하였다.
이현주 외 9인. 위암의 조기 진단을 위한 Telomerase 활성도 및 Telomerase Reverse Transcriptase 발현 측정 185
4) Telomerase 활성도의 측정
동결된 위세척액을 TRAP 방법으로 telomerase 활성도를 측정하였다. 동결된 위세척액을 녹인 후 즉시 1X 3-[3- cholamidoprophyl-dimethyl-ammonio]-1-propane-sulfonate lysis buffer (CHAPS lysis buffer) (0.5% CHAPS, 10 mM tris- HCl (pH 7.5), 1 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 10% glycerol, 5 mM β-mercaptoethanol, 1 mg/mL leupetin) 200 µL에 부 유시킨 다음 얼음에서 30분간 반응시켰다. 4℃, 12,000 rpm에서 30분간 원심분리한 후 상층액 160 µL를 이용해 단백질 함량을 측정하였다. Nontelomeric oligonucleotide를 telomerase가 인식하여 telomere를 합성하도록 10X TRAP buffer 5.0 µL, 50X dNTP 1.0 µL, TS primer 1.0 µL와 DNA standard인 TSK1 template 1.0 µL, Taq polymerase 0.4 µL, 증류수 20.0 µL를 넣고 세포분획물 2.0 µL를 첨가한 다음, TS primer가 telomerase에 의해 연장되도록 실온에서 30분 간 반응시켰다. 30℃에서 15분, 94℃에서 30초, 59℃에서 30초, 72℃에서 30초의 조건으로 31회 PCR을 진행시켰다.
이 때 HT-29의 cell line을 양성 대조군으로 사용하였다.
PCR 결과물 25 µL를 bromophenol blue와 xylene cyanol (0.25% each in 50% glycerol/50 mM EDTA)을 포함한 loading dye 5 µL와 혼합하고 0.5X TBE buffer 하에 12.5%
non-denaturing polyacrylamide gel에서 전기 영동시킨 후 silver 염색하였다.
5) 통계 분석
통계 분석은 SPSS 8.0 통계 package program을 이용하여 분석하였다. 각 대상군 간의 유의성 검증은 chi-square 검사 로 하였고, 유의수준은 p<0.05로 하였다.
결 과
1. 장상피화생의 형태
장상피화생을 조직학적 형태와 점액 염색에 의해 구분했 을 때, type 1은 4예, type 2는 0예, type 3은 17예였다.
2. 위암, 장상피화생 환자 및 대조군에서 조직의 TERT 발현
조직에서의 TERT mRNA의 발현은 대조군에서는 15예 모두에서 TERT 음성이었고(Fig. 1), 장상피화생은 21예 중 17예(81%)에서 양성이었으며, 위암은 26예 중 23예(89%) 에서 양성이었다(Table 1). 일정량의 TERT mRNA를 채취
Fig. 1. Telomerase reverse transcriptase (TERT) mRNA expression rate in tissue of the normal mucosa, intestinal metaplasia, and stomach cancer. TERT mRNA was expressed in cancer and precancerous lesion but not in normal mucosa.
Fig. 2. Semiquantitative analysis of telomerase reverse transcriptase (TERT) mRNA expression in tissue of the normal mucosa, intestinal metaplasia (IM), and stomach cancer. TERT mRNA levels were significantly higher in stomach cancer and incomplete intestinal metaplasia than in complete intestinal metaplasia and normal mucosa.
Table 1. Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) mRNA Expression in Tissue of the Normal Mucosa, Intestinal Metaplasia, and Stomach Cancer
TERT (+) TERT (-) Total
Normal 0 (0%) 15 15
Intestinal metaplasia Complete type (I) Incomplete type (III)
17 (81%) 3 (75%) 14 (82%)
4 1 3
21 4 17 Stomach cancer 23 (89%) 3 26
The Korean Journal of Gastroenterology: Vol. 42, No. 3, 2003 186
하여 2배 연속하여 희석한 RT-PCR 사진 중 TERT band가 나타나지 않는 곳까지 희석한 횟수를 정하여 조직에서의 TERT mRNA의 발현을 반정량 분석한 결과, 정상 대조군 의 반정량 값은 0, 완전 장상피화생은 0.67, 불완전 장상피 화생은 2.24, 그리고 위암의 경우는 3.0이었다(Fig. 2). 정상 점막에서 위암으로 갈수록 TERT mRNA의 반정량 값이 높 았고, 특히 정상 점막과 완전 장상피화생보다 불완전 장상 피화생과 위암에서의 반정량 값이 높았으나, 불완전 장상
Fig. 3. Telomerase activity in the gastric washing fluid of the normal mucosa, complete intestinal metaplasia (IM), incomplete intestinal metaplasia and stomach cancer by telomeric repeat amplification protocol (TRAP). Positive rate of telomerase activity in the gastric washing fluid was 65% in stomach cancer, 44% in incomplete intestinal metaplasia, 33% in complete intestinal metaplasia, and 0% in normal mucosa.
Fig. 4. Telomerase activity in the gastric washing fluid of the normal mucosa, intestinal metaplasia, and stomach cancer by telomeric repeat amplification protocol (TRAP). Telomerase activity was positive in the gastric washing fluid of the intestinal meta- plasia and stomach cancer, but negative in the normal mucosa.
피화생과 위암은 서로 차이가 없었다(p>0.05).
3. 위암, 장생피화생 환자 및 대조군에서 위세척액의 Telomerase 활성도
Telomerase 활성도는 위암 23예 중 15예(65%)에서 관찰 되었고, 불완전 장상피화생 16예 중 7예(44%), 완전 장상피 화생 3예 중 1예(33%)에서 관찰되었다. 대조군 모든 예에 서 telomerase 활성도는 검출되지 않았다(Fig. 3). 세포가 악 성화될수록 telomerase 활성도 검출이 증가하였다(Fig. 4).
4. 위암의 진단에 있어 Telomerase 활성도와 TERT mRNA 발현의 유용성 비교
위세척액에서 telomerase 활성도는 민감도 65%, 특이도 72%였고, 위암을 진단하는 데 조직에서 TERT mRNA 발현 의 민감도와 특이도는 각각 89%, 53%이었다(Table 2).
Table 2. Validity of Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) Expression in Tissue and Telomerase Activity in Gastric Washing Fluid for Early Diagnosis of Stomach Cancer
TERT (Tissue)
Telomerase (Washing fluid) Sensitivity
Specificity
89%
53%
65%
72%
고 찰
Telomerase는 유전자의 말단에 존재하여 염색체의 안정 구조를 유지하는 데 필수적인 telomere를 복구하는 DNA 중합효소로서, 대부분의 암세포에서 활성화되어 있으나 정 상에서는 활성화되지 않는다. 따라서 telomerase의 활성도 가 세포의 성장 유지 및 발암 기전과 관계가 있다는 여러 연구 결과가 보고되어 있고, 노화와의 관련도 보고되어 있 어 암의 조기 발견이나 치료제 개발 등의 목적으로 매우 중요한 연구 분야가 되어 왔다.10-12 특히 PCR 방법을 이용 한 TRAP 방법이 소개되면서 매우 적은 수의 telomerase 발현 세포만으로도 telomerase 활성도를 측정할 수 있게 되었다.13 또한, telomerase의 catalytic subunit인 TERT가 알 려지면서 telomerase뿐만 아니라 이러한 실제 telomerase 활 성화와 관련된 단백질을 측정하여 악성 종양의 조기 발견 에 도움을 주려는 연구가 진행되어 왔으며, 또한 이 인자들 을 예후 지표로 이용하기 위한 연구도 진행 중에 있다.14 Telomerase는 효소의 활성도를 보는 것으로 조직을 얻는 시간이나 검사 시기에 따라 결과가 다를 수 있으나, TERT
Myung SJ, et al. Measurement of Telomerase and TERT for Early Diagnosis of Stomach Cancer 187
는 mRNA 유전자 발현을 관찰함으로써 다른 각도에서 유 전자의 활성관계를 알아볼 수 있는 장점이 있다.
실제로 다양한 암에서 telomerase 활성화가 증명되어 있 는데, 신경모세포종의 94%,18 대장암의 93%,19 유방암의 93%,20 두경부암의 90%,21 간암의 85%,22 자궁경부암의 83%,23 폐암의 80%24에서 있었다. 본 교실에서도 대장조직 에서의 telomerase 활성도와 TERT mRNA 발현을 조사하였 을 때, 조직내 telomerase 활성도는 대장암의 97%, 대조군 의 27%에서 검출되었고, 조직내 TERT 발현은 대장암의 94%, 선종의 59%, 그리고 대조군의 45%에서 각각 검출되 었다.16
본 연구에서 조직내 TERT mRNA 발현은 위암의 경우 89%, 장상피화생은 81%에서 발현되었고, 이를 다시 분류 했을 때 불완전 장상피화생은 82%, 완전형 장상피화생은 75%에서 양성이었으며, 정상 조직은 모든 예에서 음성이었 다. 이전의 연구 결과에 의하면 장상피화생을 갖는 조직내 TERT mRNA 발현은 47% 정도로 보고되었으나 본 연구에 서는 81%로 이전 결과에 비해 높았다.25 또한 TERT mRNA 발현을 RT-PCR법을 이용하여 반정량하였을 때 정상 점막 과 완전 장상피화생보다 불완전 장상피화생과 위암에서 TERT mRNA 값이 높았으므로 실제로 telomerase의 활성과 관계된 TERT mRNA의 발현이 위암의 발암 과정에 중요하 게 작용하는 것을 알 수 있었다.
한편 telomerase의 활성이 위암과 대장암뿐만 아니라 장 상피화생 및 위선종, 대장선종과 같은 전암 병변의 일부에 서도 그 활성화가 증명된 바 있어 악성 종양의 조기 진단에 유용할 것이라는 보고가 계속되고 있다.26 실제로 수술이나 조직검사 후 얻은 위암조직의 92.3%에서 telomerase 활성 도 양성과 더불어 만성 위축성 위염의 24.6%, 장상피화생 의 33%, 이형성증의 37.5%에서도 telomerase 활성이 확인 되어27 암뿐만 아니라 전암성 병변에서도 telomerase 활성도 가 나타남을 알 수 있었다. 또한 TERT mRNA는 위암의 경 우 89%에서 TERT mRNA의 발현이 있었고, 만성 위염의 23%에서, 장상피화생의 47%에서 양성이었으며, 정상 점막 에서는 모든 예에서 발현되지 않아 세포가 악성화할수록 TERT mRNA 발현 역시 증가함을 확인하였다.25 그러나 이 러한 결과는 의심되는 병변의 조직검사가 필수적으로 수반 되어야 하는데, 장상피화생의 경우 위내시경으로 관찰시 매 우 불규칙한 점막의 소견을 보여 조기 위암이 발생하여도 변화를 알아보기가 어려워 암을 진단하기 위한 적절한 조직 의 채취가 힘들 수 있다. 이 때 전체적으로 불규칙한 점막이 관찰되는 장상피화생의 경우 위세척액을 채취하여 암표지 자의 발현이 증가한다는 것이 관찰된다면, 이러한 환자들은 치료와 관찰의 계획이 변화되어야 할 것이다. 이러한 목적 을 위한 표지자는 떨어져 나가는 세포에서도 측정될 정도로
매우 민감하여야만 한다. 이러한 관점에서 telomerase는 10 개의 암세포만 있어도 민감하게 발현되므로 이 목적으로 좋은 대상이 될 수 있다. 본 교실에서 실제로 췌장암 환자에 게서 조직이 아닌 췌액을, 대장암 환자에게서는 대장내시경 시행시 채취한 장세척액을 이용하여 telomerase의 활성도에 대한 연구를 시행하여 상당한 임상적 유용 가능성에 대한 전망을 보고한 적이 있다. 먼저 췌장암 환자의 췌액에서는 92%, 만성 췌장염 환자의 췌액에서는 18%에서 telomerase 가 발현되었으나, 대조군의 췌액 모든 예에서 telomerase가 관찰되지 않아 췌장암 진단에 췌액내 telomerase의 측정이 유용함을 확인할 수 있었다.15 또한 대장내시경 시행시 채취 한 장세척액을 이용하여 telomerase의 활성도 측정시, 대장 암의 경우 62%에서 telomerase의 활성도를 확인할 수 있었 으나 대조군에서는 모든 예에서 발현되지 않아 장세척액을 이용한 telomerase의 측정이 대장암 진단에 도움이 됨을 보 고한 바 있다.16
본 연구에서도 위세척액내 telomerase 활성도는 위암의 65%에서 양성이었고, 불완전 장상피화생의 44%, 완전 장 상피화생의 33%에서 양성이었으며, 대조군은 모든 예에서 검출되지 않아 세포가 악성화될수록 telomerase 활성도 검 출이 증가하였다. 이는 telomerase 활성을 조직이 아닌 위세 척액을 대상으로 함으로써 장상피화생이 심한 경우 점막이 불규칙하여 위암이 발생했을 때 조기 진단이 어려운 경우 가 많고, 조직검사를 병용해도 민감도가 낮다는 여러 제한 점을 극복하고자 하는 새로운 시도로서의 가능성을 제시할 수 있다. 그러나 세척액에서 telomerase 활성도의 민감도와 특이도는 다소 낮아 임상적 적용은 아직 부족한 점이 남아 있지만 좀 더 많은 수의 대상을 가진 다기관 연구 등을 진 행해 본다면 다른 결과를 기대할 수도 있을 것이며, 이러 한 가설을 바탕으로 새로운 종양표지자를 찾는 연구 등은 앞으로 시행되어야 할 것으로 생각한다. 이 외에도 이러한 telomerase 활성도와 TERT mRNA의 발현이 위암 발생의 어느 단계에서 발현하는지, 그리고 위암의 병기와 크기, 조 직학적 등급 등과의 연관성 여부에 대한 다수의 연구가 필 요하며, 이들의 발현이 위암의 예후에 어떤 영향을 미치는 지, 더 나아가 암의 진단에 필요한 TERT cutoff level 결정 을 위한 여러 추가 연구가 계속되어야 할 것으로 생각한다.
요 약
목적: Telomerase는 세포의 사멸을 억제하는 효소로 여 러 종류의 암에서 활성도가 증가되어 있다. 또한 telomerase 의 catalytic subunit인 telomerase reverse transcriptase (TERT) 는 telomerase의 활성도를 조절하며, telomerase의 활성도가 나타나기 전에 증가하는 것으로 알려져 있다. 따라서
대한소화기학회지: 제42권 제3호, 2003 188
telomerase나 TERT를 이용하여 암의 조기 진단에 활용하려 는 연구들이 있어 왔으나, 현재까지 그 유용성은 확실하지 않다. 한편 위암의 전구암 병변인 장상피화생은 3가지 아형 으로 구분하며, type 3으로 진행할수록 위암 발생의 위험도 가 증가하는 것으로 알려져 있으나, 장상피화생이 심한 경 우 점막이 불규칙하여 위암이 발생했을 경우 조기 진단이 어려운 경우가 많다. 본 연구는 정상, 장상피화생, 위암에서 telomerase 활성도와 TERT 발현을 알아보고, 위암과 장상 피화생의 형태별 TERT의 발현을 반정량 분석하여 위암의 조기 진단에서의 유용성을 평가하였다. 대상 및 방법: 위암 26예, 장상피화생 21예, 정상 대조군 15예를 대상으로 하였 다. 내시경검사시 조직검사 시행 전 50 mL 생리식염수로 세척한 후 세척액을 얻고, 이후 조직을 얻어 -80℃에 저장 하였다. 장상피화생은 병리 소견과 점액 염색에 의해 3 형 태로 구분하였다. 세척액에서 telomeric repeat amplification protocol (TRAP)을 이용하여 telomerase 활성도를 측정하였 다. TERT 발현은 조직에서 RNA를 분리한 후 reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR)으로 검사 하였고, 이 중 일부 예에서 TERT mRNA를 추출하여 반정 량 분석을 시행하였다. 결과: 조직에서의 TERT mRNA의 발 현은 대조군에서는 0%, 장상피화생은 81%에서 양성이었으 며, 위암은 89%에서 양성이었다. 조직에서의 TERT mRNA 의 발현을 반정량 분석을 해 보면 정상, 완전 장상피화생, 불완전 장상피화생, 위암 순서로 증가하였다. 특히 정상 점 막과 완전 장상피화생보다 불완전 장상피화생과 위암에서의 반정량 값이 높았으나(p<0.05), 불완전 장상피화생과 위암은 서로 의미 있는 차이가 없었다. 위세척액에서 telomerase 활 성도는 정상 대조군에서는 검출되지 않았고, 완전 장상피 화생(33%), 불완전 장상피화생(44%), 위암(65%)으로 갈수 록 활성도가 증가되었다. 세척액에서 telomerase 활성도는 민감도 65%, 특이도 72%였고, 위암을 진단하는 데 TERT 발현의 민감도와 특이도는 각각 89%, 53%로 다소 낮았다.
결론: 위암 및 위암의 전구 병변에서 TERT mRNA가 높게 발현되고 악성화할수록 반정량 값이 증가하는 것으로 보아, 전구암 병변에서 암으로 진행하는 데 TERT 활성이 관여할 것으로 생각한다. 또한 위암과 장상피화생의 세척액에서 telomerase 활성도의 측정이 위암의 고위험군 환자에서 조 기 진단에 사용될 수 있는지는 향후 전향적 연구가 진행되 어야 할 것으로 생각한다.
색인단어: 위암, 장상피화생, Telomerase, Telomerase reverse transcriptase (TERT)
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