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도은법에서 신속한 은 침투를 위한 극초단파의 활용

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임상병리검사과학회지

:

제 27 권 제 1 호

1995.

도은법에서 신속한 은 침투를 위한 극초단파의 활용

원광보건전문대학 임상병리과 제갈승주 • 최영자 · 정주연

Application of Microwave Irradiation for Rapid Impregnation of Silver in Metallic Histologic Staining

Jekal

,

Seung-Joo.

,

Choi

,

Young-Ja.

,

Chung

,

Ju- Youn

I빼. 01 Clinic

o1

뻐thology, Wonkwang He

o1

th Junior College

Silver impregnation techniques are frequently used for demonstration of argyrophilic or argentaffin substances in histopathology. The conventional methods for silver staining generally require long incubation of lhr to 24hr or more at 60 t. The purpose of this study'was car- ried out to investigate the effect of microwave irradiation for rapid silver impregnation. Silver impregnation techniques used in this study were Masson - Fontana

,

periodic acid methena- mine-silver(PAM), Grocott’s methenamine-silver(GMS), and AgNORs staining. Tissue sam- ples fixed by immersion in 10 % neutral buffered formalin and processed for routine light mi- croscopy. Tissue sections immersed in silver solution were irradiated to 30 seconds interval using microwave oven, and then incubated for 5 minutes. We could be shortened the impreg- nation time within lmin incubation after 3min(65 t ), 5min(80 t ), and 4min(75 t)-irradia- tion by microwave in Fontana - Masson, PAM, and GMS staining, repectively. These staining activity were also nearly equal to conventional method. However, AgNORs staining was some- what inferior in staining activity. In addition, tissue structures were well-preserved in all samples. This result suggested that microwave irradiation was useful to shorten impregnation time in some silver staining.

Key

wαds

: microwave irradiation

,

silver impregnation

,

rapid staining

I.

서 론 으며, 근래에는 점점 그 범위가 확대되어 사구체 모세혈 관기 저 막4), 진균과 주폐 포자충 (Pneumocystis

carinii) 5.6)

도은법은 오래 전부터 신경섬유 1) 를 비롯하여 벨라닌2),

Leptospira

균n, 훼장의 랑겔한스섬의 A 세포8) 및 세포 세망섬유3) 의 증명에 필수적인 염색법으로 사용되어 왔 증식능올 보기 위한 핵소체 형성부위 (argyrophilic

nu-

q * u n 6

1 l 4

(2)

cleolar organizer regions : AgNORs)

증명

9)

둥에 이 르 기까지 널리 활용되고 있는 염색법으로 잘 알려져 있 다.

전통적인 염색과정을 30분 이하로 단축하는데 성공한

이후,

Hafiz

등28) 은 극초단파를 이용하여 항산성간균

증명에 사용하는

Ziehl- Neelsen

방법의 염색시간을 단축 그러나 도은법은 사용에 있어서 은침전물의 발생, 시킬 수 있음을 보고하였고, Bonner와 Armati

29

)는 신 절편의 탈락, 재현성 등의 문제점과 일부 방법들에 있 경과 근조직의 염색 촉진에 효과가 있다고 하였으며,

어서 조직표본제작에 소요되는 시간이 길어 신속 진단

Rugerio - Vargas

등30) 은 세망섬유, 성상세포, 신경섬유,

으로서 부적합하다는 것이 지적되어 왔다10, 11) 이 문제 크롬친화성세포의 도은법에 사용한 결과 은 침투시간 접들은 많은 개량과정을 거쳐 변법들이 소개되어 점차 단축과 비특이성 은침전물 발생이 억제된다고 하였다.

개선되어가고 있기는 하지만 아직도 큰 진전을 보지못 이밖에도 온도조절장치를

mlcrowave

oven에 장착하여 하고 있다. 이 중 특히 염색 소요시간은 현재의 모든 플라스틱포매 절편과 세포도말표본의

Romanowsky

검사들이 신속성을 가장 중요한 요소로 여기고 있다는

-Giemsa

염색에 사용한 결과 특정 염색온도에서 염색 점에서 조속히 극복해야 할 과제 중의 하나이다. 이런 이 양호하게 나타난다는 것을 확인하여 극초단파 사용 관점에서 도은법 사용시 가장 시간이 많이 소용되는 에는 온도조절이 필수적인 요소임을 지적하였다31) 더 은 침투과정에서 침투시간을 단축시키려는 시도들이 욱이 근래에는 Gomori 의 trichrome염색과 Mallory의 있어왔으나 그다지 큰 실효를 거두지 못하고 있다 12-1 5)

phosphotungstic acid hematoxylin(PT AH)

염색의 매 한편, Mayer

l6

) 가 처음으로 물리적인 극초단파 열 염제로 사용하는 Bouin 이나

Zenker

액에 극초단파를

(microwave

heat) 을 이용하여 조직을 초단위로 신속 조사하여

60

"C 에서 1 시간 이상 소요되는 침적시간을 히 고정하는 방법을 보고한 이후, 광학 및 전자현미경 45초 이하로 단축하였다는 보고32) 도 있어 염색과정에 적 연구에서 고정이 매우 선속하고 조직 보존효과도 서의 극초단파 이용이 점차 확대되고 있다.

우수한 것으로 조사되었고 l7~2l), 조직화학이나 면역조 따라서 본 연구는 병리조직 진단에 흔히 사용되고 직화학 고정에서도 효과가 있음을 보고하였다22 , 23) 또 있는 도은법 중 일부 은 침투과정이 오래 걸리는 4가 조직편의 탈수, 투명, 파라핀 침투과정을 30분 이내로 지 방법을 택하여 전통적인 방법과 극초단파 조사방법 단축시킬 수 있다는 보고도 있다24) 간의 은 침투시간을 비교검토하였고, 아울러 극초단파 극초단파는 1886 년 Hertz에 의해 발견된

3 X 108-9

조사방법에 있어서 은용액 온도와 적정 염색성과의 관 의 주파수와

0.1-1.0

m 의 파장올 갖는 비이온 전자파 련성도 조사하였다.

(nonionizing

radiation) 로25) 물질에 운동에너지를 전달

하여 열올 상승시키거나, 전기장 (electric field) 을 변화

II.

재료 및 방법 시킴으로써 물과 같은 쌍극자 (dip이e) 와 상호 작용하는

것으로 알려져 있다26) 혼히 가정용 전자렌지에 사용하

1.

실험조직과 염색법 종류 는 극초단파는

2,450 MHz(2.45

GHz) 의 주파수를 사용

하는데, 마그네트론 (magnetron) 이라 부르는 진공관내 본 실험에는 피부(사람)

,

신장, 진균감염 폐(사람)와 에서 발생한 이 주파수는 파장이

12.4

cm로 물질중에 림프절(쥐

;

Sprague-Dawley) 의

4

종류의 조직을 사 함유된 수분분자에 흡수되어

2.45

billion/초의 속도로 용하였고, 염색방법으로는 피부의 멜라닌 증명에

Fon

물분자를 진동시켜 마찰열을 발생시키며 27), 이 때 발생

tana - Massodl,

사구체모세혈관 기저막 증명에

period-

한 마찰열과 극초단파의 파장에 의해 액체 내의 물질

ic acid -methanamine

silver(PAM) 염색 4), 진균 증명에 수송과 확산을 촉진시키는 것으로 알려져 있다24) Gomori의

methanamine

silver(GMS) 염색 5) 과 핵소체형 극초단파를 이용한 염색 촉진에 관한 연구로는

Brinnl4)

성부위 증명을 위해

AgNORs

염색 9) 을 선택하여 시행 이 처음으로 금속침투법에 적용하여 24 시간이 걸리는 하였다.

- 184-

(3)

2.

표본제작 방법

4

종류의 조직을 통상적인 방법에 따라

10 %

중성 완충 포르말련에 24 시간 고정하여 수세한 후 자동 침 투기

(Shandon Citadel 1,000, England)

에 옮겨 탈수,

투명, 파라핀 침투 후 파라핀에 포매하였다. 이 파라핀 블럭을 회전형 박절기 (Microm, Germany) 로 박절하여 3 때 두께의 절편을 제작하여 염색 전에 크실렌에 탈 파라핀, 하강계 열 알코올을 통해 함수, 증류수에 수세 하여 사용하였다. 또한 비특이적 은 침착을 방지하기 위해 3차 증류수를 사용하여 은 용액을 제조하였다.

은 침투 이외의 과정은 전통적인 방법에 따라 수행하 였다.

4.

염색결과의 평가

전통적인 방법으로 염색된 것중 가장 좋은 표본을 대조로 삼아 극초단파 조사시간에 따라 색의 농담, 콘 트라스트, 밝기의 정도 및 은 침전물 발생 정도에 의 거하여 염색강도을

0"'6

등급으로 나누어 반정량적으 로 분류하였다. 전혀 염색이 안된 절편은

0,

은 침착이 겨우 인정되는 절편은

::t,

은 침착은 인정되나 아주 희미한 절편은

1+,

은 침착정도가 비교적 뚜렷이 인 정되나 증명할 구조물을 정확히 인식할 수 없는 절편 은

2+,

은 침착정도나 증명구조물을 뚜렷이 인식할 주파수

2,540 MHz,

최대출력 800W의

Panasonic mi

수 있는 절편을

3+,

증명할 구조물 외에 다른 비특이

crowave oven(NE-8051,

Japan) 을 사용하였고,

power

적 은 침착이 있는 절편을

4+,

지나친 은 침착과 함 level은 low를 선택하여 실험하였다. 먼저 극초단파 조 께 비특이적 은 침작이 많이 발생하여 구조물 사이에 사시간과 은 용액의 온도와의 관계를 조사하기 위하여 구별이 어려운 절편을 5+ 로 점수화하여 평가하였다.

3.

극초단파를 이용한 염색과정

직경

14 cm,

높이 5cm 의 가정 전자렌지용 플라스틱

용기에 증류수

100 ml, 250

ml를 각각 채운 후 그 정중 앙에 40ml의 물이 들어있는

Coplin

jar(glass) 를 넣어 극초단파 조사 후

Coplin

jan뀌 물의 온도를 30초 간격 으로 8 회씩 즉시 측정하여 평균온도를 구하였다. 예비 실험 결과

Coplin

jar내 물의 상층부와 밑바닥 온도가 약

10

t 차이를 보였기 때문에 일관성 있는 결과를 얻기 위해

Coplin jar

밑바닥으로부터

3cm

위에 눈금 을 표시한 후 측정하였다.

그 다음 실제 사용할 은 용액과 물의 온도차가 있는 가를 조사한 결과 거의 온도차가 인정되지 않아서 물 의 온도를 기준으로 실험 결과를 검토하였다. 또 외부 플라스틱 용기에 들어있는 물의 양에 따라 온도차이가 있어서 본 실험에서는

100ml

물을 기준으로 실험하였 다.

위의 조건을 설정한 후

4

종류의 절편 2 장씩을 준비 하여 각각의 염색법으로 전통적인 방법에 따라 은 용 액에 침투시킨 것과 은 용액에 극초단파를

1, 2, 3, 4,

5분 조사한 후

1, 2, 3, 4,

5분간 방치한 염색방법의 염색결과를 비교하였다. 극초단파 조사 절편의 경우

III.

결 과

1.

극초단파 조사시간에 따른 온도변화

위의

microwave oven

조건에서 30초 간격으로

Coplin

jar내 물의 온도를 측정한 결과

Fig.

1 과 같은 경향을 나타내었다. 극초단파 조사 후 온도변화는 일 정 비율은 아니지만 10초당 약

1.1'" 1.2

t 의 비율로 상승하였고 물에 양에 따라 온도가 감소하는 경향을 나타냈으며, 특히 조사시간 90초와 120초 사이에서 온 도가 8t 차이로 가장 높은 증가를 보였다.

2.

광학현미경적 관찰

4

종류의 도은법 염색결과 대조군과 극초단파 조사 군간의 형태학적 차이는 발견할 수 없었다.

Fontana- Masson

염색의 경우 대조군 (60

uC,

90분)에서는 표피 의 기저층을 따라 melanocyte내의 멜라년 과립이 짙은 갈색 내지 흑색으로 뚜렷이 구별되었다 (Fig.

6a).

극초

F h

n

1 l i

(4)

X 10l) ml

250 ml

’ x

-

4

4 v

캉 -

-

g

v a

/ r r

/

- - -

-

f

-

t

ι ι

100

HO

60

40

(니:)

νi:i잉』잉{I를μ

’{‘

20

300 270

2~()

lHO 210 150 90 120

60 30 0

Time (sec)

Fig. 1. Temperature versus time curve for water solution heated by microwave irradiation Conditions for microwave irradiation; Start temperature: 27

t

, Power level: low, Reagent volume in Coplin jar (glass) : 40 ml, Height of measurement of temperature in Coplin jar : 3 cm, Difference of temperature between the uppermost and the lowest in C- oplin jar : approx. 10

t

분, 방치시간 3분부터 보우만낭상피 기저막이 약하게 염색되기 시작하여 조사시간 3분, 방치시간 5 분에서 조사시간 4분

,

방치시간 2분 사이에 요세관상피 기저 막이 흑갈색으로 약하게 나타났으며, 조사시간 4분 방 치시간 3분부터 5분에서 혈관중막기질이 염색되었고,

조사시간 5분, 방치시간 1 분에서 2분까지 사구체모세 혈관 기저막이 뚜렷이 염색되었으며 대조군보다 더 양 호한 염색성을 나타내었다. 그 후 조사시간 5분, 방치 시간 3분부터는 다량의 은 침착물 발생으로 인하여 비 특이적 염색반응이 증가하였다. 따라서 조사시간 5 분,

방치시간 1 분 총 염색시간 6분에서 가장 짧은 염색시 간으로 대조군과 유사한 양호한 결과를 보였다 (Fig.

3, Fig 7b). GMS

염색에서는 대조군 (60 t

,

50분)의 경우 폐의 괴사부위에서 Aspergillus로 인정되는 균체가 짙 은 흑갈색으로 염색되어 녹색배경과 뚜렷이 구별되었 고 분생자의 격벽이나 분생자뱅이 45' 로 분지되어 있

- 186-

단파 조사군에서는 극초단파 조사 5분에서 1 분 방치 후부터 약한 반응을 나타내어 5분 방치까지 그대로 염 색성을 유지하였다. 극초단파 조사시간 2분, 방치시간 1 분부터 반응성이 증가하면서 극초단파 조사시간 2분,

방치시간 5분에서 대조군과 일치하는 적정 염색성을 나타내고 조사시간 4분, 방치시간 5분까지 그대로 유 지되다가 조사시간 5분, 방치시간 1 분부터

melanocyte

이외의 구조들까지 비특적으로 염색되었다. 따라서 가 장 짧은 적정 염색시간은 조사시간 3분(약 65 t)

,

치시간 1 분 총 염색시간 4분으로 조사되었다 (Fig.

2, Fig. 6b). PAM

염색에서는 대조군 (60 t

,

60분)의 경

우 사구체모세혈관 기저막, 혈관중막기질 (mesangium)

,

보우만낭상피 기저막 및 요세관 기저막이 흑갈색 띠

모양으로 뚜렷이 구별되었으며 핵은 자색, 세포질 연

한 분홍색, 적혈구는 분홍색으로 보존 상태도 매우 양

호하였다 (Fig.

7a).

극초단파 조사군에서는 조사시간

3

(5)

::L ,::>..:. -'7

얻을 이 림프계열의 세포들로 구성되어 있고 연한 황갈색의 각 세포핵내에 AgNORs 이 뚜렷한 흑색 반점으로 1 개 에서 3 개까지 포함되어 있었으며 세포들의 보존 상태 도 우수하였다 (Fig. 9a). 극초단파 조사군에서는 조사 시간 3분, 방치시간 3분부터 회미한 반점들이 나타나 기 시작하여 점차 반응성이 증가하여 조사시간 4분(약

75

t)

,

방치시간 4분에서 5분까지 AgNORs 반점이 비 교적 확실하게 인정되기는 하였으나 대조군에 비해 다 소 약하게 나타났다 (Fig. 5

, Fig. 9b).

그러나 조사시간 5분 이후에는 다시 반웅성이 급격히 감소하였고, 표본 에는 시약 제조시 사용되었던 젤라틴으로 추측되는 응 고된 물질들이 산발적으로 존재하였다.

이상의 결과를 보면 전통적인 염색방법에 비해 단파 조사방법에서 뚜렷한 염색시간 단축효과를 수 있었다 (Table

1).

음도 확인할 수 있었다 (Fig.

8a).

극초단파 조사군에서 는 조사시간 2분, 방치시간 3분 후부터 약한 반웅을 나타내어 방치시간 5분까지 그대로 유지하였다. 극초 단파 조사시간 3분, 방치시간 1 분부터 반응성이 증가 하면서 극초단파 조사시간 3분 방치시간 5분에서 대조 군과 일치하는 적정 염색성을 나타내었고 조사시간

4

분, 방치시간 2분까지 그대로 유지하였다. 그 후 조사 시간 4분, 방치시간 3분에서 5분까지 비특이적 은 침 착이 발생하였고 조사시간 5분 이후부터는 지나친 은 침착으로 인하여

Aspergillus

균체를 구별하기가 어려 웠다. 조사시간 4분(약 75 t)

,

방치시간 1 분 총 염색 시간 5분에서 가장 짧은 염색시간으로 대조군과 일치 하는 양호한 염색결과를 얻을 수 있었다 (Fig.

4, Fig.

8b).

마지막으로 AgNORs 염색의 경우, 대조군 (60 t

,

암소, 45분)에서는 림프절의 종중심 (germinal

center)

|ncubation Time

~l

mÎn

딘 2

min [:3 mÎn

룹 4

min

앓 5

min

HO

57 65 75

Tt: mì‘앙 ratllre

45

0

(UC)

Fig. 2. Relationship between staining intensity and temperature in Fontana - Masson stain.

o =

no impregnation ; ::!:

=

minimal impregnation ; 1 +

=

slight impregnation ; 2 +

=

moderate impregnation ; 3 +

=

good impregnation ; 4 +

=

slight overimpregnation ; 5 +

=

strong ovenmpregnatlOn

” /

m

(6)

4S

I ξ1

min

2 min L J3 min

min

텔 5

min

(‘’C) 57 6 5 ' 75 80

Temperature

! )-_+

0

Fig 3. Relationship between staining intensity and temperature in PAM stain.

80

1 min

min

ι

45 6 +

s

+

0

+4 +3 +•

·{--gIh::

”‘

;--i··ι

I +

(OC)

Fig 4. Relationship between staining intensity and tempera ture in GMS stain

%

1 l

4

(7)

>i 1f

...

r

’‘ ν

..

t

._ .,..

Oð- t

z

.‘

-

r;. +

1 -

!

J min 2 min j 3

r떼 ~

min

'-.'~:

5 minll

0

45 57 65 75

Temperature

80 ("C)

Fig. 5. Relationship between staining intensity and temperature in AgNORs stain.

Fig. 6. Skin biopsy sections of human. (a) Section impregnated with ammoniacal silver for 90 min at 60 t without microwave irradiation. (b) Section impregnated with ammoniacal silver and with microwave tech.

nique for 1 min incubation after 3 min( 65 t) -irradiation. Fontana - Masson, X400.

Fig. 7. Kidney biopsy sections of adult rat. (a) Section impregnated with methenamine - silver for 60 min at 60 t without microwave irradiation. (b) Section impregnated with methenamine-silver and with microwave technique for 1 min incubation after 5 min(80 t) -irradiation. PAM, X400.

%

1 , 4

(8)

Fig. 8. Fungus-infected lung biopsy sections of human. (a) Section impregnated with methenamine - silver for 50 min at 60 t without microwave irradiation. (b) Section im- pregnated with methenamine - silver and with microwave technique for 1 min incubation after 4 min(75 t) -irradiation. GMS, X400.

Fig. 9. Cervical lymphnode biopsy sections of adult rat. (aO Section impregnated with colloid silver for 45 min at 20 t without microwave irradiation. (b) Section impregnated with colloid silver and microwave technique for 4 min incubation after 4 min(75 t) -ir- radiation. Staining intensity of b section showed to less decrease compared with a sec- tion. AgNORs, Xl,OOO.

Table 1. Comparison of temperature and time required for optimal staining in the conventional and microwave-irradi- ated method

Conventional Microwave method

Staining

lrradiation lncubation Time saved

techniques method (min(C )

time(min(C) time(min) (min)

Fontana - Masson 90/60 86

PAM 60/60 5/80 54

GMS 50/60 4/75 45

AgNORs 45/20 4/75* 4 37

*Staining activity appeared to less decrease as compared with conventional method

- 190-

(9)

N.

고 찰 색액에 출력

700

W의 극초단파를 조사하여 적정 염색 시간을 조사한 결과 혈철소 염색인

Perls

염색에서 병리조직 진단은 그 진단적 중요성에도 불구하고 검

Perls

용액에 조사시간 8초, 방치시간 2초에서,

Fontana

사시간이 길다는 것이 큰 단점으로 지적되어 왔다. 따 -Masson 염색의 은용액 침투는 조시시간 10초로 3 회반 라서 그동안 검사과정을 단축하기 위해 고정을 비롯한 복 조사후 방치시간 3초에서, Romanowsky-Giemsa 염 파라핀 포매과정 및 염색분야에 있어서 많은 시도들이 색의 경우 Giemsa 액은 조사시간 15초 방치 30초에서 이루어지고 있다. 이 시도들 중 하나로 극초단파 조사 가장 양호한 염색성을 얻을 수 있다고 하였다. 그러나 시 발생하는 열이나 극초단파 파장의 신속한 물질 투 본 실험의

Fontana - Masson

염색에서는 극초단파 조 과성을 이용하여 염색시 반응성을 향상시켜 반응시간 사시간 3분, 방치 1 분에서 적정 염색성을 나타내어 위 을 단축시키려는 많은 관심이 모아지고 있다 14 , 28-30) 의 결과와 차이가 있는 것으로 나타났다. 이러한 차이 극초단파 조사에 의한 염색 촉진효과에 대해서는 아 는

mlcrowave

oven내에 물의 양, 용기의 종류나 크기,

직 확실히 규명되어 있지 않으나 극초단파 조사시 물 출력 Watt에 따라 극초단파의 투과도가 달라지므로3l),

질내에 발생하는 드라마틱하고 균일한 온도의 상승에 각 실험실 조건에 따라 적정조건을 설정하여 염색마다 기인하는 것으로 알려져 있다33) 또한 이 때 발생한 열 일관성있게 적용하여야할 것으로 생각된다.

은 조직내로 염료의 확산올 촉진하여 조직과 염료사이 또한

Boon

등31) 은

Romanowsky - Giemsa

염색에 대 의 결합에 걸리는 시간을 단축시키며 3l), 세포벽의 투과 한 극초단파 조사연구에서 온도가

60

t 이상 상승하

성을 증가시키는 효과가 있어서 34), 조사시간이 증가할 면 핵염색이 저하한다고 하였고,

Rugerio - Vargas

등30) 수록 염색강도가 증가된다고 하였다때) 도 세망섬유, 성상세포, 신경섬유, 크롬친화성세포의

본 실험에서 극초단파 조사시간에 따라 용액의 온도 도은법에서 극초단파를 이용한 결과 은 침투온도가 를 조사한 결과 10초당 약 1.

1'" 1.2

t 로 온도가 상승

50

t 초과하지 않아야 좋은 결과를 얻는다고 하였다.

하였고

microwave oven1-/1

물의 양이 많을수록 용액의 본 실험에서도 염색방법에 따라 차이는 있으나 일정

온도가 낮은 것으로 나타나

Leong

등 19) 의 결과와 일치 온도 이상으로 침투온도가 상승하면 과잉의 은 침착이 하였다. 염색결과 4종류 중

Fontana - Masson, GMS

및 발생되었는데, 이는 도은법에 극초단파를 이용할 때는

PAM

염색에서는 전통적인 방법의 염색시간보다 극초 온도가 중요한 요소로 작용하는 것을 의미하며 온도 단파를 이용한 방법에서 은 침투시간을 최대 6분 이내 상승에 따라 염료결합력이 증가하나 특정 구조물에 대 로 단축시킬 수 있었다. 그러나

AgNORs

염색의 경우 한 특이도는 감소되는 것으로 추정된다.

AgNORs

반점이 극초단파 조사시간 4분 방치시간 한편, 극초단파 조사에 의한 고정시 전자현미경상

4분에서 구별이 가능하였으나 조사시간 5분 이후부터 세포기질의 손상38), 핵이질염색질의 응축%), 세포질의 젤라틴 응고가 발생하여 반응성이 급격히 저하됨을 알 공포형성 40), 세포돌기의 파괴 4l), 세포막의 파괴 및 미 수 있었다. 이 같은 결과는 앞의 여러 저자들이 지적 토콘드리아의 손상42) 이 발생하는 것으로 보고하였으며,

한 바와 같이 극초단파 조사에 따라 온도가 상승하므 정 등43) 도 고정시 극초단파의 조사시간이 짧고 최종온 로써 염료의 확산이 촉진되며 3l), 세포의 투과성이 증가 도가 낮을수록 세포손상이 심하고 염색성도 약해진다 하여 염색강도가 점차 높아진다는 것을 알 수 있었으 고 보고하였다. 본 실험에서는 극초단파 조사시간 5 분 나35 , 36),

AgNORs

염색과 같은 일부 염색에서는 일정 (약

80

VC) 까지 검토하였으나 전통적인 방법에 비해 온도 이상으로 온도가 상승하면 오히려 반응성이 저하 조직의 구조적인 차이나 손상이 인정되지 않았으며,

되므로 염색방법에 따라 적절한 온도 조절이 필요한 이는 고정이 완결된 후에 염색과정에서의 극초단파조

것으로 사료된다. 사는 광학현미경적 수준에서 조직의 구조에 큰 영향을

Moorlag

등37) 은 파라핀포매 절편에서 특수염색시 염 미치지 않는 것으로 사료된다.

1 , 4

n

ν

1 l 4

(10)

이상의 내용을 종합해 볼 때 극초단파 조사가 벨라 닌, 진균, 기저막 등의 호은성 물질과 은의 결합력을 촉진하며, 은과 조직간의 결합에는 온도가 매우 밀접 히 관련되어 있다고 생각된다. 또한 은과 조직의 결합 기전에 대해서는 확실히 알 수는 없었으나, 극초단파 조사에 의해 물분자의 진동으로 마찰열이 발생하여 은 용액이 가열되고 이로 인해 조직을 향한 분자운동이 항진됨으로써 호은성 물질과 은과의 결합가능성이 증 가하는 것으로 예측할 수 있었다.

따라서 도은법 뿐만아니라 다른 특수염색에도 활용 하여 효과를 거둘 수 있을 것으로 추정되며 병리조직 분야의 신속 진단을 위해 더 많은 연구가 있어야 할 것으로 사료된다.

V. 결 론

본 실험은 파라핀절편을 사용하여

Fontana - Masson, PAM, GMS,

AgNORs

염색의 은 침투과정에 전통 적인 방법과 극초단파 조사방법 간의 은 침투시간를 비교하여 극초단파 조사에 의한 은 침투시간의 단축효 과를 조사하여 임상에서의 그 활용 가능성을 제시하기 위해 시도하였다. 4종류의 염색에 극초단파를 조사하 여 은 침투시간을 조사한 결과 기존의 전통적인 방법 에 비해

Fontana - Masson

염색에 서는 90분에서 4분 (조사시간 3분 (65 t)

,

방치시간 l 분),

PAM

염색은 60분에서 6 분(조사시간 5 분 (80

OC), GMS

염색은 50 분 에서 5분(조사시간 4 분 (75

UC),

방치시간 1 분)

,

방치시 간 1 분)으로 신속히 침투시간을 단축시킬 수 있었으며 조직의 구조도 전통적인 방법과 큰 차이를 보이지 않 았다. 단,

AgNORs

염색의 경우 은용액 성분에 젤라틴 이 함유되어 있는 특수성으로 인해 만족할만한 결과를 얻을 수 없었다. 따라서 도은법에 있어서 극초단파 활 용은 일부 방법에서만 특수성을 고려한다면 염색시간 단축에 크게 기여할 것으로 조사되었다.

REFERENCES

1. Bielschowsky M. Die Silberimpragnation der Neuro

fibrillen. J Psychol Neurol 3 : 169 -189

,

1904.

2. Masson P. La glande endocrine de l' intestine chez 1’homme. Comptes rendus hebdomadaires se- ances de l' Academie des sciences 158 : 59

,

1941.

3. Gomori G. Silver impregnation of reticulum in paraffin section. Am J Pathol 13 : 993, 1937.

4. Jones DB. Glomerulonephritis. Am J Pathol 29 : 33-51, 1953.

5. Grocott RG. A stain for fungi in tissuesections and smears during Gomori’s methanamine silver nitrate technic. Am J Clin Pathol 25 : 975 - 979, 1955.

6. Churunkian CJ, Schenk EA. Rapid Grocott’s me thenamine-silver nitrate method for fungi and Pneumocystis carinii. Am J Clin Pathol 68: 427 -428

,

1977.

7. Elliott KG. A simple step to enhance the demon- stra tion of Leptospira in Y oung’s Warthin -Starry technique. Stain Technol 63 : 122-124, 1988.

8. Hellerstrom C, Hellman B. Some aspects of silver impregnation of the islets of Langerhans in the rat. Acta Endocrinologica 35 : 518, 1960.

9. Ploton D, Bobichon M, Adnet J. Ultrastructur- allocalization of NOR in nucleoli of human breast cancer tissue using a one-step Ag-NOR staining method. Biol Cell 43 : 229 - 232, 1982.

10. La Velle A. Some introductary comments on silver staining. Stain Technol 60 : 271-273, 1985.

11.

제갈승주 등

:

조직검사학. 고려의학

p. 180-181, 1991.

12. Mahan CT, Sale GE. Rapid methenamine silver stain for Pneumocystis and fungi. Arch Pathol Lab Med 102 : 351-352.

13. Musto L, Flanigan M, Elbadawi A. Ten-minute silver stain for Pneumocystis carinii and fungi in tissue sections. Arch Pathol Lab Med 106 : 292- 294, 1982.

14. Brinn NT. Rapid metallic histologic staining using

? ι n

υ

1 l i

(11)

the microwave oven. J Histotechnol 6 : 125 -129

,

1986.

1983. 25.

이 재형

:

전기치료학. 대학서 림.

pp 441, 1995.

15. Hayashi 1, Tome Y, Shimosato Y. Thiosemicarba- 26. Rabinowitz JR, Olcerst RB, Mumford WW. The zide used after periodic acid makes methanamine description of a system to irradiate cells in cul- silver staining of renal glomerular basement mem- ture with microwaves. DHEW publication(FDA) branes faster and cleaner. Stain Technol 64: 185 77-8026 : 216-229

,

1977.

-190, 1989. 27. McLee BD, Finch ED. Analysis of reported physi- 16. Mayer CP. Histological fixation by microwave ologic effects of microwave radiation Adv Biol

heating. J Clin Pathol 23 : 273 - 275

,

1970. Med Phys 14 : 163 - 223

,

1973.

17. Login JR. Microwave fixation versus formalin fix- 28. Hafiz S, Spencer RC, Lee M, Gooch H, Duerden ation of surgical and autopsy tissue. Am J Med B1. Use of microwaves for acid and alcohol fast Technol 44 : 435-437

,

1978. staining. J Clin Pathol 38 : 1073-1076

,

1985.

18. Estrada JC, Brinn BT, Bossen EH. A rapid meth- 29. Bonner J, Armati PJ. Microwave assisted stain- od of staining ultrathin sections for surgical pa- ing of nerve and muscle biopsy tissue. Biotech thology TEM with the use of the microwave Histochem 60 : 236- 238

,

1991.

oven. Am J Clin Pathol 83: 639-641, 1985. 30. Rugerio-Vargas C, Rivas-Manzano P, Delarosa- 19. Leong ASY

,

Daymon ME

,

Milios J. Microwave ir-

radiation as a form of fixation for light and elec tron microscopy. J Pathol 146 : 313-321

,

1985.

20. Login GR

,

Dvorak AM. Microwave energy fixa- tion for electron microscopy. Am J Pathol 120 : 230 - 243, 1985.

21. Lai FM, Lai KN, Chew EC, Lee JCK. Microwave fixation in diagnostic renal pathology. Pathology 19: 17-21

,

1987.

22. Hopwood D, Coghill G Jr, Ramsay G, Milne G, Kerr M. Microwave fixation: Its potential for routine techniques, histochemistry, immunocytochemistry and electron microscopy. Histochem J 16 : 1171- 1192

,

1984.

23. Leong ASY

,

Milios J. Rapid immunoperoxidase staining for label lymphocyte antigens using mi- crowave irradiation. J Pathol 148: 183-187, 1986.

24. Boon ME

,

Kok LP

,

Ouwerkerk - Noordam E. Mi- crowave-stimulated diffusion for fast processing of tissue: reduced dehydrating

,

clearing

,

and im pregnating times. Histopathology 10: 303-309,

Rugerio C, Parra - Gamez L, Ortiz - Hernandez R.

Microwaves applied to silver impregnations with ammoniacal silver carbonate. Biotech Histochem 69

: 273-278

,

1994.

31. Boon ME, Kok LP, Moorlag HE, Gerrits PO, Suurmeijer AJH. Microwave-stimulated staining of plastic embedded bone marrow sections with the Romanowsky-Giemsa stain: Improved stain ing patterns. Stain Technol 62 : 257 - 266, 1987.

32. Barone CA. Microwave stimulation for commonly used mordants. Biotech Histochem68: 122 -124, 1993.

33. Kok LP. Fundamentals of microwave-stimulated staining. In: standardization and quantitation of diagnostic staining in cytology. Coulomb Press Leyden, Leiden. pp. 82 - 97, 1986.

34, Spencer RC, Hafiz S, Cook

ç.

Effect of micro- wave energy on the metabolism of Entero- bacteriacea. J Med Microbil 19 : 267 -272

,

1985.

35. Argall K

,

Armati P J. The use of microwave fixa tion in the preparation of cell cultures for obser- vation with the scanning electron microscope. J

n ν 1 l

A

(12)

Electron Microsc Tech 16 : 347 -350

,

1990. Bioelectromagnetics 2 : 141-150

,

1981.

36. Patterson MK, Bulard R. Microwave fixation of 40. Lust WD, Passonneau JV, Veech RL. Cyclic cells in tissue culture. Stain Technol 55 : 71- 75

,

1980.

37. Moorlag HE

,

Boon ME

,

Kok LP. Microwave methods for reducing staining time to seconds.

Stain Technol 62 : 357-360

,

1987.

38. Adams MT, Barthakur N, Lambert NG,Kasatiya SS. Cytological effects of microwave radiation in chinese hamster cell in vitro. Can J Get Cytol 20

: 23-30. 1978.

39. Stensaas LJ, Partlow LM, Bush LG, 1versen PL,

adenosine monophosphate

,

metabolites

,

anrl phos phorylase in neural tissue : A comparison of meth- ods of fixation. Science 181 : 280-282, 1973.

41. Webber MM, Barners FS, Seltzer LA, Bouldin TR

,

Prasad KN. Short microwave pulses cause ultrastructural. membrane damage in neuroblasto- ma cell. J Ultrastruct Res 71 : 321-330, 1980.

42. Galvin MJ

,

Hall CA

,

McRee D1. Microwave radia- tion effects on cardiac muscle cells in vitro.

Radiat Res 86 : 358-367

,

1981.

Hill DW, Hagmann MJ, Gandhi OP. Effects of milli- 43.

정성오, 임효빈

: Paraffin

포매 조직표본 제작에서

meter-wave radiation on monolayer cell cultures :

11. Scanning and transmission -electron microscopy.

microwave를 이용한 간장과 신장조직의 고정에 관 한 연구. 대한임상병리사회지

25 : 40-52, 1993.

A

4

n

υ

--4

수치

Fig.  1.  Temperature  versus  time  curve  for  water  solution  heated  by  microwave  irradiation  Conditions  for  microwave  irradiation;  Start  temperature:  27  t ,  Power  level:  low ,  Reagent  volume  in  Coplin  jar (glass)  : 40 ml ,  Height
Fig.  2.  Relationship  between  staining  intensity  and  temperature in  Fontana - Masson  stain
Fig  4.  Relationship  between  staining  intensity  and  tempera ture in  GMS  stain
Fig.  5.  Relationship  between  staining  intensity  and  temperature in  AgNORs stain
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