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미국자리공 채취 3

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Academic year: 2022

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1. 개요

□ 연구목적

- 우연히 미국자리공을 보았을 때 다른 식물들과는 달리 자리공에는 벌레가 생기지 않은 것을 관찰하게 되었다. 그 점이 너무 신기해서 검색을 통해, 타가작용과 구충작용이 있다는 것을 알게 되었다. 평소에 친환경적인 제품에 관심이 있어 이 식물에 대해 알게 된 후 친환경적인 제품으로 활용하면 좋겠다고 생각해서 연구를 계획했다.

□ 연구범위

- 미국자리공의 타감작용과 살충작용 효과 확인 및 활용방안에 초점을 두고 후에 추가적으로 친환경적 제품으로 사용하기 위하여 인체에 미치는 영향도 알아본다.

- 진행 단계

1. 자리공과 제충식물의 사전조사 2. 미국자리공 채취

3. 식물을 통해 자리공의 타감효과 확인 4. 곤충을 통해 자리공의 살충효과 확인

5. 실험 결과에 따른 미국자리공의 활용방안 제시 6. 친환경제품 활용 가능성 확인

2. 연구 수행 내용

□ 이론적 배경 및 선행 연구

○ 이론적 배경

미국자리공[ poke-berry , 美國─ , Phytolacca America]

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북아메리카가 원산지이다. 굵은 뿌리에서 줄기가 나온다. 줄기는 윗부분에서 가 지가 갈라지고 붉은빛이 강한 자주색이며 높이가 1∼1.5m이다. 잎은 어긋나고 길 이 10∼30cm의 긴 타원 모양 또는 달걀 모양의 타원형이고 양끝이 좁고 가장자리 가 밋밋하다. 북아메리카가 원산인 다년생 초본으로 전국 각지의 평지나 길가에서 생육한다.

타감작용(Allelopathy, 他感作用)

타감작용이란, 식물이 성장하면서 일정한 화학물질이 분비되어 경쟁되는 주변의 식물의 성장이나 발아를 억제하는 작용을 말한다. 이 억제를 통하여 자신의 생존 을 확보하고 성장으 촉진하는 결과를 얻게되는 작용이다. 하지만 때로는 자신의 생존에 이익이 되는 주변 식물의 성장을 촉진하는 작용을 하기도 하며 타감작용 은 이를 포함한다. 타감작용은 상호 대립되는 식물끼리 땅속의 영양분을 빨리 또 는 보다 많이 흡수하기 위해 서로 경쟁하면서 진화되었다. 서로 경쟁관계에 있는 식물을 함께 식재하면 서로경쟁하기 때문에 성장이 빨라지기도 하며 대립식물을 고사시키기도 한다. 예를 들면 왜래종인 가시박은 타감물질을 분비하여 주변의 식 물이 성장하지 못하도록 하며, 결국 말라죽게 한다. 소나무도 타감작용을 하는데 햇빛을 많이 받기 위해 다른 나무들이 자라는 것을 방해하는 물질을 내뿜는다.

타감물질은 인체에 긍정적인 영향을 주는 것도 많아 신약개발에도 활발하게 이용 되고 있고 최근에는 이러한 식물의 특성을 이용하여 친환경농법이 개발되기도 한 다.

○ 선행연구

• Insecticidal Activities and Repellent Effects of Plant Extracts against the Brown Planthopper(Nilaparvata Iugens Stal) - 김연국, 이종진, 최만영

: 실험 결과 자리공의 살충률은 70% 정도이며, 부위별로 살충률에 차이를 보였다.

(뿌리>열매>줄기 순)

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• 미국자리공 중독으로 인한 의식변화 및 복통 증상을 호소한 2례(김양원, 윤유상, 김미란, 박상훈, 최준철)

: 마국 자리공에 중독될 수 있지만 이는 매우 드문 경우임.

뿌리>줄기>열매 순으로 독이 강함.

• 제충국의 살충성분 특성 및 이용기술 연구(양영택)

: 살충 성분이 가장 많은 제주 B 계통을 만개했을 때 50도 이하에서 건조, 분쇄한 뒤 75% 이상 농도의 에탄올이나 기계유 유제에 8배량 비율로 1~3주 침출 후 여과 시키는 것이 효과적임.

• 제충국, 멀구슬 추출물의 전적에 대한 독성 및 배추좀나방 방제 효과

: 제충국의 꽃과 멀구슬 열매를 건조하여 추출액을 만들어 가정용 분무기를 사용 하여 추출액을 잎과 곤충에 살포하여 결과 관찰

-->자리공은 줄기, 잎, 뿌리 등이 모두 독성을 거쳐 음독할 경우 소화기계 증상과 신경학적 증상이 유발되는 사례를 보여준다.

칠레이응애에 대해서 제충국은 5일째 생존율이 81.1%, 멀구슬은 77.8%였다.

• Allelopathic Effect of Some Weed Species Extracts and Residues on Alfalfa - 정일민, 김기준, 김광호, 안종국 [韓作誌(Korean J. Crop Sci.) 39(3) : 285~294(1993)]

: [추출법] 5g의 건조식물을 24℃의 증류수와 에탄올 250ml에 24시간 shaker에 추 출하고 실험 중에 발생한 오염을 막기 위해 0.2um Nalgene filterware에 거른 것 을 실험 재료로 사용하였다.

• Allelopathy of Tagetes minuta L.Aqueous Extracts on Seed Germination and Root Hair Growth - 김지현, 심규철, 이규진

: [추출법] 재배 후 24시간 이내 식물 200g을 2L의 증류수와 에탄올에 shaker를 사용하여 25℃에서 24시간 추출하였다. 농도조절을 위해 원래 추출액을 100%로

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놓고, 증류수를 첨가하는 방식으로 농도를 조절하였다.

• 자리공에서 확인된 물질들

사포닌, 알코올, 트리테르펜, 리그난, 플라보놀, 아놀릭 산, bayogenin, hederogenin, 2-hydroxyoleanolic acid

(www.ijrpbsonline.com/files/RW11.pdf)

• 나방 실험 방법 ①, 추출물과 나방 구입처

- 나방 실험 방법 ① (3령 유충) : 탄산 가스로 20초간 마취시킨뒤 유충의 배판에 미량국소처리기를 이용하여 농도별 국소처리하였다. 무처리는 1uL acetone을 국소 처리 하였다.

- 추출물 구입처 : 한국식물추출물은행

- 실험 나방 구입처 : 농촌진흥청 국립식량과학원(벼맥류부 간척지농업과 -031.290.6600)

(혹명나방에 대한 매실나무 추출물의 살충활성)

• 나방 실험 방법 ② : 엽절편법

- 열무 잎을 직경 5cm로 잘라 증류수에 적신 여과지가 놓인 페트리디쉬에 놓고 배추 좀나방 3령 유충을 10마리식 접종 한 후 식물 추출물을 각각 10초간 hand sprayer로 살포하여 후드에서 2시간 건조하였다. 각 처리는 처리 당 3반복으로 수 행하였고 무처리는 증류수를 살포하였다.

- 살충률은 [사충수/(사충수+생충수)]x100

(배추좀나방(Plutella xylostella)에 대한 식물추출물의 살충력 평가)

• 타감 작용 실험 방법 - 생체중의 증가 정도 - 수용성 추출물 사용

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(대두박 추출물의 논 잡초에 대한 타감작용 효과 및 Phenole 화합물 조성) - 20%, 40%, 80%로 실험한 경우마다 가장 억제되는 식물이 다르다.

- 증류수로 추출

- 사료 작물의 생장 및 수량조사는 농촌진흥척의 농업과학기술 연구조사 분석기 준 화본과 사료 작물편 조사기준에 의하여 6회 관주 후 21일째에 조사하였다.

- 상대 생장률(relative elongation of seedling growth ratio : RER)은 [처리구의 생 장값/대조구의 생장값]x100 -> 상대 생장률 : 식물의 생장해석에서 개체의 성장 속도(건조중량의 증가속도)를 개체의 중량으로 나눈 값

- 사료작물 수량에 미치는 영향을 조사하기위해 엽신중, 생체중, 건물중의 증가정 도를 파악하기도 하였다.

(서양금혼초(Hypochaeris radicata L.) 추출물의 화본과 사료작물에 대한 타감작용 효과 및 phenole 화합물의 조성)

□ 연구주제의 선정

○ 연구주제의 선정 과정

학교 하늘 정원에서 식물들을 기를 때마다 생기는 많은 벌레들 때문에 좋은 성과를 내는데 어려움을 겪은 적이 많았다. 그런데 동네 근린 공원에서 다른 식물들과는 달리 미국 자리공의 열매와 잎에는 벌레가 생기지 않은 것을 관찰하게 되었다. 그 점이 너무 신기해서 자료 조사를 통해 더 자세한 정보를 얻게 되었고, 미국 자리공을 연구 주제로 선정하게 되었다.

처음에는 미국 자리공과 비슷한 효과가 있다고 알려진 달마시안 제충국을 연구에 포함하여 둘을 비교해보려고 하였다. 하지만 부산대 과학 교육과 배진호 교수님의 자문 후 덜 알려진 미국 자리공의 효과를 발굴하는데에 초점을 맞추어 미국 자리공만을 대상으로 한 연구를 계획하였다.

우리는 배진호 교수님께 연구 방향에 대한 것을 자문드렸고, 식물을 이용한 화학 약품의 대체제 개발을 중심으로 연구해보는 것이 좋다는 답을 받았다. 이러한 형태의 대체제는 실제로도 많은 식물을 대상으로 연구가 진행 중이기 때문에 연구 방향에 적합하다고 생각되어 연구 방향을 확실하게 정할 수 있었다. 또 미국 자리공의 효과를 알아보겠다는 애매모호한 연구 과정을 실험 A와 B 등으로 나누어 체계적으로 설계해야

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하며 실험 대상에도 타당한 근거가 있어야 할 것이라고 자문해주셨다.

따라서 우리는 선행논문과 자문 내용을 바탕으로 타감 작용과 살충 및 섭식 저해 작용에 미국 자리공이 나타내는 효과를 연구의 틀로 삼아 활동을 계획하게 되었다.

□ 연구방법

1. 미국 자리공의 사전조사

: 선행논문 및 관련 서적 조사를 통해 실험 대상인 ‘미국 자리공’에 대해 자세히 알아보고, 알아보고자 하는 내용을 확실히 하도록 한다.

2. 미국 자리공 채취 및 추출

: 실험 A와 실험 B를 진행하는데 필요한 미국 자리공을 직접 캐고 다양한 용매를 이용해 추출해본다.

3. 미국자리공의 타감 작용 확인(실험 A)

: 미국자리공 추출물을 농도별, 용매별로 다르게 하여 희석시킨 후, 실험대상인 열무에 뿌려본다. 뿌린 후의 성장 길이 측정 및 성장 변화율 조사를 통해 미국자리공의 타감 작용을 확인해본다.

4. 미국자리공의 제충 작용 확인(실험 B)

: 미국자리공 추출물을 농도별, 용매별로 다르게 하여 희석시킨 뒤 절편형으로 자른 배추잎에 분사하여 배추좀나방에게 섭식시킨다.

* 2014.07.12. 부산대학교 배진호 교수님의 자문 1. 미국 자리공 독성 성분의 추출 및 분석 방법

보통은 크로마토그래피를 사용한다. 지금 실험하려고 하는 타감 작용과 살충 작용 에 대한 선행 논문을 찾아보고 그 실험과 같은 환경에서 추출하면 될 것이다(타감 작용, 또는 살충 작용을 일으키는 성분의 성질이 비슷하므로). 또 LD50(실험 적정 농도)에 대한 정보를 찾아보고 만약 없다면 다양한 농도로 실험을 해야 할 것이

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다.

2. 선행 연구 조사한 제충국과 자리공, 둘 중 하나를 선택해야 할까요?

두 가지 식물을 연구하기는 벅찰 것이다. 둘 중 학생들이 생각한 실험의 목적성과 부합하는 식물을 고르는 것이 좋다.

3. 앞으로의 연구 방향(타감 작용과 살충 작용)

타감 작용에 관한 실험 A, 살충 작용에 관한 실험 B로 나누어 두 가지 실험을 병 행하는 것이 좋을 것 같다. 앞으로 실험 설계를 위해 타감 작용 실험에 필요한 추 출물과 식물 세 가지, 살충 작용 실험에 필요한 추출물과 곤충 세 가지 정도를 정 해야한다.

□ 연구 활동 및 과정 ○ 가설 설정

- 미국 자리공은 타감 작용과 살충 및 섭식 저해 작용에 효과가 있을 것이다.

-

○ 실험 과정

- 1) 타감 작용 실험(실험 A) 1. 미국자리공뿌리를 캔다.

2. 추출방법을 다르게 하여 추출물을 만든다.

* 미국자리공 추출방법 (2가지)

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①자리공 뿌리 5.7Kg에 물 6L를 넣고 달임(건강원에 의뢰) - 농도를 나누어서 뿌림 (12.5%, 25%, 50%)

②에탄올을 용매로 한 자리공 추출물을 한국추출물은행에 의뢰 -에탄올 추출물의 효과를 확인하기 위한 것

3. 대상에 추출물 실험

* 실험 식물의 선정

사람들이 농작물로 사용하는 식물 중에서도 흔하고, 성장 속도가 빨라 결과확인 이 쉬운 열무를 대상으로 정하였다.

 - 추출물을 에탄올추출물②/물(대조군)/ ①농도1(12.5%) /①농도2(25%) /①농도 3(50%)로 나누어서 3일에 한 번씩 추출물을 주고 관찰했다.

 - 물을 주기 전마다 식물의 길이를 재어 기록해두었다. 그 기록을 가지고 그래 프를 만들어 차이를 눈으로 보기 쉽게 만들었다.

- 2) 살충 및 섭식 저해 작용의 확인(실험 B) 1. 미국자리공의 추출

실험에 쓰인 미국 자리공 추출물은 실험 A의 두 가지 추출방법 중 첫 번째인

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자리공 뿌리 5.7Kg에 물 6L를 넣고 건강원에서 달인 것을 각각 농도 12.5%, 25%, 50%으로 희석하여 사용하였다.

2. 대상에 추출물 실험

* 실험 유충의 선정

 실험 대상은 배추좀나방의 1~2령 유충으로 정하였다. 배추좀나방의 피해 작물은 배추, 무, 양배추 등 십자화과 채소이다. 1세대의 경과기간이 짧은 점, 성충이 되 어도 몸이 10mm 내외로 작아 실험이 쉽다는 점과, 우리가 키운 열무도 배추좀나 방 유충에 의해 많은 피해를 입는 점에 근거하여 이 유충을 실험 대상으로 선정 하게 되었다. 유충은 농촌진흥청에서 분양받은 배추좀나방 유충 1~2령을 이용하였 다.

 대상에 추출물을 실험하는 방법은 엽절편법을 선택하였다. 추출물을 실제 살충 제로 사용하였을 때 곤충에 직접 뿌리기보다는 식물체에 뿌릴 것으로 예상하였기 때문에 엽절편법을 통해 섭식 저해율과 살충률을 관찰하고자 하였다.

 배추 잎을 면적 5x5(25)㎠으로 잘라 페트리디쉬에 놓고 배추 좀나방 1~2령 유충 을 15마리씩 섭식시킨다. 이때 배추 잎은 각각 증류수, 추출물 12.5%, 25%, 50%

희석액을 분무기에 넣고 10회씩 분사한 뒤 15분 상온에서 건조한 것을 이용하였 다. 이렇게 섭식한 잎절편은 48시간 뒤 꺼내어 사충수와 섭식한 잎의 면적을 관찰 하였다.

○ 시행착오 극복

- 타감작용 1차 실험에서의 시행착오

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위는 자리공 뿌리를 캔후 말려서 에탄올과 증류수를 용매로 하여, 용매와 뿌리 를 20%농도로 하여 교반기에 24시간동안 돌린 추출물이다.

이때 추출물의 농도가 일정하지 않은 점, 또 에탄올을 용매로 하였을때 실험 결 과가 에탄올 때문인지 추출물 때문인지 정확하지 않은 문제가 생겨 미국 자리공 의 뿌리를 자르고 말려서 전문기관에 의뢰하고 증류수는 농도별로 나누어 실험을 해보고, 에탄올 추출물의 효과를 확인하기 위한 실험을 설계하였다.

 위 추출 과정에서 추출물을 에탄올추출물/물(대조군)/증류수 세 구역으로 나누 어서 규칙적인 간격으로 물을 주고 비교 관찰하였다.

실험군별로 개체수를 일치시키지 않았으며 관찰 주기 또한 규칙적으로 하지 않 아 2차 실험에서는 관찰 주기를 일치시키고 추출물을 3일에 한번씩 주었으며 개 체수를 각 실험군별로 각 96개씩 정하였다.

3. 연구 결과 및 시사점

□ 연구 결과

(1) 실험 A ; 타감 작용의 확인

<표 1> 미국자리공의 용매별/농도별 추출물 투여 시 열무의 생장 길이

* 단위 : cm (소수 셋째자리에서 반올림)

** 오차범위 : ±0.005(cm)

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** 한 화분 당 존재하는 실험 대상 100개 중 구획 별로 20개를 선정하여 각각의 길이를 잰 후, 그 길이의 평균값으로 수치를 조사하였다.

<그래프 1> 미국자리공의 용매별/농도별 추출물 투여 시 열무의 생장 길이

* 단위 : cm (소수 셋째자리에서 반올림)

** 오차범위 : ±0.005(cm)

<표 2>

미국자리공의 용매별/농도별 추출물 투여 시 열무의 생장 길이의 성장 변화율

* 성장변화율  전단계의전체성장길이

현단계의성장길이 전단계의성장길이

× 

** 단위 : % (소수 셋째자리에서 반올림)

*** 오차범위 : ±0.005(cm)

<그래프 2>

미국자리공의 용매별/농도별 추출물 투여 시 열무의 생장 길이의 성장 변화율

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* 성장변화율  전단계의전체성장길이

현단계의성장길이 전단계의성장길이

× 

** 단위 : % (소수 셋째자리에서 반올림)

*** 오차범위 : ±0.005(cm)

 성장 길이 그 자체만으로 보았을 때 (표, 그래프 1)는 최종적인 열무의 길이가 대조군>에탄올>증류수 추출물 12.5%>증류수 추출물 25%>증류수 추출물 50% 순으 로 컸던 것으로 나타났지만, 각 구간별 성장 변화율의 길이를 비교해보았을 때(표, 그래프 2)는 성장변화율의 변화폭이 크기도 하고, 경우에 따라 성장 변화율의 순 서가 달라 해석하기 난해한 결과가 나왔다. 이는 그 날의 날씨나 기온차이에 따른 차이인 것으로 추정된다. 하지만 후반부에 가면, 성장 길이만 보았을 때의 결과와 같은 순으로 타감작용이 큰 것으로 나타났다. 더 오랜 기간 동안, 관찰 주기를 더 짧게하여 자세히 관찰하면 훨씬 더 확실한 결과를 얻을 수 있을 것 같다.

(2) 실험 B ; 섭식 저해 및 살충 작용의 확인

 섭식 후 48시간 뒤 잎 절편을 꺼내어 섭식된 잎의 면적을 쟀다. 이때 모눈종이 를 사용하여 어느 정도 섭식되었는지 계산한 결과는 다음 그래프와 같다.

(13)

<그래프3> 미국자리공 농도별 추출물의 섭식 저해율

* (농도 X에서 섭식 저해율)=대조군에서섭식된넓이

대조군에서섭식된넓이 농도에서섭식된넓이

x100

** 단위 : % (소수 둘째자리에서 반올림)

 실험 결과 증류수를 분사한 무처리에서는 129㎟를, 추출물 12.5%에서는 49㎟, 추출물 25%에서는 77㎟, 추출물 50%에서는 47㎟가 섭식되었고, 계산한 섭식 저해 율은 추출물 50%, 추출물 12.5%, 추출물 25% 순서로 높았다. 따라서 추출물의 농 도가 진할수록 섭식 저해율이 높게 나타나는 것은 아니며, 농도의 간격을 좁게하 여 실험을 반복하면서 섭식 저해율이 가장 높게 나타나는 특정한 농도를 찾아야 할 것이다.

<그래프4> 미국자리공 농도별 추출물의 살충률

* (살충률)=사충수 생충수

사충수

x100

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** 단위 : % (소수 둘째자리에서 반올림)

 48시간 뒤 계산한 살충률은 그래프4와 같이 나타난다. 살충률은 추출물 50%, 추 출물 12.5%, 추출물 25%, 대조군 순으로 높다. 이때 대조군을 기준으로 상대 살충 률을 계산해보면 살충률은 추출물 50%에서 약 57.1% 증가하였고 추출물 12.5%에 서 약 42.9%, 추출물 25%에서 약 28.6% 증가하였다. 살충률 또한 섭식 저해율처럼 농도에 살충률이 비례하지 않으므로 살충률이 최대가 되는 특정 농도가 있을 것 으로 추정된다.

□ 시사점

이 과제연구를 통해 궁금했던 점을 직접 실험해보고 연구해보면서 해결할 수 있는 좋은 기회가 되었다. 또한 평소에 자주 사용해보지 못했던 실험기구들을 자주 사용해보 면서 학교에서 좀 더 많은 학생들이 적극적으로 다양한 과학 연구에 참여하는 계기였다.

하지만 연구과정에서 뜻대로 실험이 진행되지 않아 어려움을 겪을 때도 많았고, 계획이 지연되는 바람에 하고자 했던 실험을 하지 못해 아쉬운 것 같다.

4. 홍보 및 사후 활용

농작물을 키울 때 우리들은 여러 가지 화학 제품들을 사용한다. 그 중 농약은 해충을 죽이는 용도로 거의 식물을 기르는 대다수의 사람들이 사용하고 있다. 하지만 농약이 만들어지기 전에도 해충들은 존재했고 몇몇 식물들은 이러한 환경에 적응하여 진화되어 왔다. 이러한 종류의 식물이 바로 제충식물이다. 식물 스스로가 독성을 지님으로써, 자신을 보호하는 것이다. 우리는 이런 식물들로 제충제를 만들어서 어떤 효과가 있는지 실험을 통해 알아보았다.

위 과제연구의 실험결과를 종합하여 작성된 논문은 학교 과학논문집에 올라갈 예정이 다. 또한 이 실험을 통해 찾은 최고의 제충제를 실생활에서도 사용할 수 있도록 활용 방안을 제시하여 화학 제품으로부터 지구와 환경, 사람 모두에게 이득이 되는데 이바지 하도록 한다.

5. 참고문헌

Bioactive Triterpene Saponins from the Roots of Phytolacca americana - Liyan Wang, Liming Bai, Takashi Negasawa, Toshiaki Hasegawa[Journal of Natural

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Product 2008, 71, 35-40]

Committee For Veterinary Medicinal Products Phytolacca Americana - EMEA/MRL/600/99-FINAL/April 1999

3-Oxo-30-carbomethoxy-24-norolean-12-en-28-oic Acid, a Nortriterpene Artifact from Phytolacca americana - Ki Sook Yang, Won Sick Woo and Sam Sik Kang Total Synthesis of (-)-Isoamericanin A and (+)-Isoamericanol A - Lisa I.Pilkington and David Barker

Insecticidal Activities and Repellent Effects of Plant Extracts against the Brown Planthopper(Nilaparvata Iugens Stal) - 김연국, 이종진, 최만영 [韓應昆誌 47(1):

65~74(2008)]

<미국자리공의 근권 토양산성도의 변화> - 박용목, 박범진, 최기룡

<미국자리공 중독으로 인한 의식변화 및 복통 증상을 호소한 2례> - 김양원, 윤유 상, 김미란, 박상훈, 최준철

<제충국의 살충성분 특성 및 이용기술 연구> - 양영택

<제충국, 멀구슬 추출물의 전적에 대한 독성 및 배추좀나방 방제 효과>

Allelopathic Effect of Some Weed Species Extracts and Residues on Alfalfa - 정 일민, 김기준, 김광호, 안종국 [韓作誌(Korean J. Crop Sci.) 39(3) : 285~294(1993)]

Allelopathy of Tagetes minuta L.Aqueous Extracts on Seed Germination and Root Hair Growth - 김지현, 심규철, 이규진

[네이버 지식백과] 미국자리공 [poke-berry, 美國─] (두산백과) [네이버 지식백과] 타감작용(Allelopathy)

참조

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