Comparative Study on the Efficiency of two Media;

태한임상뱅리사회지

:

제 12권 제

1

호

1980

LoewensteÌn - J ^ensen

培地와 Ogawa培地上에 있어서의 縮核園 據養 成績

慶北大學校 醫科大學 附屬病院 臨rn病理科 李健一·金慶淑·金重明·吳成泰·李健熙

Comparative Study on the Efficiency of two Media;

Loewenstein-Jensen and Ogawa

Kuhn-Il Rhee , Kyung Suk-Kim , J yung-Myung Kim ,

~Sun훌-Tae

Oh and Kun-Whi Lee

Depart ηwnt

of Clinical Pathology

School of Medicine , Kyungpook National University

=Abstract=

A total of 706 clinical specimens_ 546 sputums , 86 cerebrospinal fluids , 32 urines , 23 pu- ses , 15 ascitic fluids and 4 thoracic fluids were cultu i:' ed into both Loewenstein-Jensen and Ogawa (3%)tb media.

Efficiency of two media was compared , and concluded as follow;

The positive rate of cultures made into the Loe

¹

Nenstein-Jensen medium was 9.5% and that of Ogawa medi 'l m was 4.6%.

The length of time required to form colony , the Lo\venstein-Jensen medium shorter than those on the Oga

^,;

va , and the colonies on the Loewenstein-Jensen medium were more abundant than those on Ogawa medium.

Considering the data obtained. it can be stated that the Loewenstein-Jensen medium is superior over Oga\va medium for the primary isolation of Mycobacterium tuberculosis from clinical material that were submitted for the diagnostic purpose.

序 論

結核뾰의 確定 該斷은 結核園의 證明에 依하는 것 이 며， 이 結核題의 證明을 하기 馬하여서는 可檢資料로 부터 主로 檢鏡， 培養 및 動物接種의 세 가지 方法을 利用하는 것 이 普通이 다.

이 中에서 特허 培養方、뿜은 매우 重要한 園證明方、월 의 하나로서 日常 檢훌方法어1 있어 가장 普遍的으로 利用되고 있다. 이 目的으혹 使用되는 培地의 種類는 여러가지로 많야 있￡나 그 中에서도 固形 分離培地로 서 日常 檢흉에 많이 쓰여지고 있는 培地는

Loewen-

stein-Jensen培地(L-J 培地)와 Ogawa培地 (3.0%)

(0培地)이다. 前者는 主로 歐美 各國에서 많이 쓰여차 고 있는 것이며 後者는 日本에서 널리 쓰여지고 있다.

-般的￡로 우리나라에서는 이 兩培地릎 쓰는 碩向 이 많은데

III

추어 이 兩培地의 優컸에 對한 比較 觀察 은 보지 뭇 하였다.

著者들윤 이 點에 휩眼하여 前記 兩培地를 flJ用하여 結核園의 分離 培養을 하여 若千의 成績을 얻었기어1 報告하는 바이다.

寶驗方法 實훌했資料

可檢資料

:

總 706例의 可檢物을 使用하였는데 그

!lià

細는 다음과 같마.

@홈%찾 546例

隨7，1(￥없

15 ^1/

腦￥￥觀~ ^86ν

觸 7，1(

4ν

H農

23ν

* ^{32 1/}

培地

: Loewenstein-

Jensen培地1)와 Ogawa(小川) 培地2) (3.0%) 를 利用하였는데 그 成分은 各各 다음 과같다.

Loewenstein-

Jensen培地(L-J 培地)

原滅

: KH 2 P0 4 2.4g

MgS0 4 .7H 2 0 0.24g Magnesium citrate 0.6

Asparagine 3.6

Glycerin 12ml

Aq. dest. 600ml

이 原被에 감자 澈級 30g을 加하여 透明化 할배까 지 加溫한 뒤에 56⁰C로 冷회]시켜 여커에 全&1ß滅

1 , 000

ml와

2%-malachite green

20ml를 加하여 잘 混和 하여 適當量 (6-8ml)~로 分注하고 第

l

日에

85

⁰

C 40

分間， 짧面으로 만들어 加熱， 癡固， 滅園하며

,

第

2

日 에

70

⁰

C

30:5}間， 加熱， 滅園을 反復하여 使用하였다.

Ogawa(小川)培地 (3.0%)(0 培地) 原被

: KH 2 P0 4 3g

Sodium glutamate Ig

Aq. dest. 100ml

이 原被(100ml) 에

glycerin 6ml , 2% malachite green 6ml ,

全뺏被 200ml를 加하여 잘 混合하여 澈 園 試驗에 6-8ml썩 分注하고 이것을 血淸癡固器에 짧面부로 만들어 둡히고 第

1

日에

85

⁰

C

40分間， 第 2

日파 第 3 日에 各各 80⁰C에서 40分間 加熱 避固 澈園 하여 使用하였다.

훌뚫方法

可檢資料의 處理方法

:

嘴짧은

Petroff

方法3) 에 準 하여 處理하였 는데

,

郞

4%

NaOH블 同量A로 加하여 混和하여 37⁰C에 서 60分間 消化시 켜

3 , OOOrpm

20分間 遠心沈數하여 上淸을 버 리 고 그 沈澤에

phenol

red滅 1 潤을 加한 다음 IN-HCl滅으로 中和하여 이 의 1 潤을 前記 兩혐地에 各各 同數로 接種， 培養 하였다.

題水， 民， 體 및 觸水는 嘴俠에 準하여 處理한 것 을 培養하였고 腦홉題陳은 그대로 遠沈하여 그 沈澤를 取 하여 培養하였다.

可檢資料의 培養方法

:

前記와 같이 處理.한 資料를 出處!31j(資料別)로 同數로 接種한 다음 接種面을 水平

으로 維持하여 培養하였는데 接種後의 培養의 觀察은 1週까지는 每日， 그 뒤부터는 每週 1 回썩 8週까지 觀 察 하였으며 培養成績의 判定은 集落數 1-60個까지는 +(10個 單位로 6區分함)， 集落數가 많아 서로 廳合되 어 헤아럴 수 없올 程度를 -1+라고 하였다.

1훌훌훌成構

全體的으로 L-J培地 706個， 0 培地 706個， 總

1412

個의 培地上에 結核題의 分離 培養 成績을 보면 L-J培 地의 培養 陽性率은

9. 5% (67 /7 06) ,

0 培地의 그 陽性 率은

4.6%

(33/706) 으로서 L-J培地에 서 의 陽뾰率은

0

培地의 그것 보다는 倍 以上 이었마. (第 1 表)

Table 1. Positive Culture rates of Mycobacterium tu berculosis

Medium used Loewenstein -J ensenl

Ogawa I

Positive culture rate

D=9. 5-4.6=4.9(%)

9.5(%) I 4.6(%) I

S.Ed=../ 9.5X90.5 + 4.6x95.4

v 706 706

_ I 859. 75

^,

438.84

-ι------r-_ _ _ _

v 706 706 I 1298.09

I~

-서=씨 .83= 1.

_v 35 706

「므←=t= 객.9 늑 3.62>2

_{S.Ed ι 1.} 35 . _. ---

67 /7 06 33 /7 06

이것을 可檢物 種類別로 보면 嘴짧 546例에 있어서 는 L-J培地에 서 는

9.5% (52/546) ,

0 培地에 서 는

4.8%

(26/546) ,

題水에 15例에서는 L-J와 O 培地에 各各

6.7% (1 /15) ,

腦휴購波 86例에서는 L-J培地上에

9.3%

(8/86) ,

0 培地上에

2.3% (2/86) ,

腦水 4f71J 에서는

L.J

와 O 培地上에 各各

2.5% (1 /4) ,

體 23例에서는 L-J와 O 培地上에 各各

8.7%(2/23) , *

^{32例에 서 는 L-J培地}

上

9.4% (3/32) ,

0 培地上에

3.1%

(1 /32) 의 陽性率을 불 수 있었다. (第 2 表)

集落 形成 期間을 週單位로 보면 大體로 L-J培地에 서는 3-6週 였고， 0 培地에서는 4-7週 였다. 또 L-J 培地에서는 集\落 形成이 4週에 된 것이 카장 많았는데 比하여 O 培地에서는 5週에 펀 것이 카장 많았다. 이 것을 可檢物의 種類別로 보면 陽짧에 있어서는 L-J培 地에 서 分離훤 52例의 集落 形成은 3-6週에 이 루어 졌는데 4週에 23例 (44.2%) 와 5週에 21例 (40.4%) 로

Table 2. Positive culture of Mycobacterium tuberculosis on Loewenstein-Jensen and Ogawa medlum from various specimens

Positive Culture Kind of specimens Total-Cases-

Cultured on Loewenstein-}ensen medium on Owaga medium

Case % Case %

Sputum 546 52 ( 9.5) 26 ( 4.8)

Ascitic fluid 15 l ( 6.7) l ( 6.7)

CSF 86 8 ( 9.3) 2 ( 2.3)

Thoracic fluid 4 1 (25.0) l (25.0)

Pus 23 2 ( 8. 7) 2 ( 8.7)

Urine 32 3 ( 9.4) l ( 3.1)

( 4.6)

民에 있어서는 L-}培地에서 分離흰 3例中 2í7U는 3週어1 1 例는 4週어] 集落 形成이 되였고， 0 培地에서 分離펀 1 例는 5週어1 集落 形成。1 되였다. (第 3 表 빛 圖

1 , 2)

分離된 結校홉홉의 發育程度를 료면 大體로 L-J培地上 에서의 發育程度는 O 培地上의 그 보다는 높았는데 可 檢物 別로 보면 團않에서는 L-}培地에서는 分離된

52

例中 +가 49培，+t가 3例켰고， 이 +를 集落數로 보 면 1-10個가 29例 1l -20[固가 12例. 21-30個가 4例，

41-50個가 3例， 51-6。個카 1例였는데

•

0 培地에서 分離펀 26엠中에는 什는 1例도 없었고 모두 +였￡며，

+를 集落數로 보아도 41-50個. 51-60個의 集落數를 가진 것은 L-J培地에서의 그 보마는석었다. 題水에서 는 兩培地上에서 分離된 各 1例는 L-J培地의 集落數는

( 9.5) 33 67

가장 많았다. 이 에 比하여 O 培地上에 서 의 分離띈

26

樣의 集落 形成은 4-7週에 이루어 졌고， 가장 많이 形成 된 것이 5週에 12例 (46.296) 와 6週에 7例 (26.996)

였다. 題水에서는 L-J와 O 培地에 各 1 例가 分離되었 는데 L-J培地에서는 4週 O 培地에셔는 5週에 各各 集 落이 形成되었고， 腦흉體滾에서는 L-J培地에서 分離펀 8例中 5例 (62.5%) 가. 4週에 3例 (37.5%) 가. 5週에 集 落形成이 되였는데 O 培地에셔 分離된 2例는 5週어1

1

例. 7週에 1例였다. 題水에서는 L-J와 O 培地에 모두 1例 썩 分離 되었는데 L-}培地에서는 5週에 .0 培地에 서는 6週에 集落야 形成되었고， 體에서도 L-}와 O 培 地에 함께 2例 씩 分離 되었는데 L-J培地에서는 4週에

0培地에서는 5週에 各各 2例가 集落을 形成하였￡며，

(Total) 706

8(11.9) 32(47.8) 25(37.3) 2( 3.0) 0 67( 100)

0 5 (1 5.2) 17(5 1. 5) 8(24.2) 3( 9.1) Table 3. Length of Time the 1st colony appeared

Sputml 웹짧 _| ^l _l Kin짧iFn

_시

_{Pus I U rine} l _{I (Total)}

Case (%) Ic:::~~%) ^{\c ase (%)} ICa::u~~) Ic ase (%)1Case (96) ICase (%)

5 ³ ￥&$ 짧:칭 ^@3:g;l

뼈

1 4

윈

nu nU 1 ,‘

nU nU nU

nU 1i nU nU

5(19.2) 12(46.2)

! 7(26 9) 2( 9. 7) I 26( 100)[

Specimens

Colonv Case

Media formation Weeks

” ”

Loewen-I Intervals stein-Je-I of Colon- nsen m- I y forma-i edium I tion

! IntervalS!

Ogawa I of Colon- medium \ y forma-

t lO n

33 ( 100)

”

(Total)

c ‘ tses };))

,

_、

)

υ

:..:~ :)CJ

ZO -1 0

1:) :-\0

I

‘

oewen stein- Jensen meclium

10 2 C!

-’

i i

i

시 ν

J ----

u

2

46.2

。

I \

I \

L \

/21 \ 40.4\

\

\

\

\

\

、

\

\

\

\

。 0. 7

\

\

')

" _\

\

\

、

.

[

υ

6 7 8

( \reek;ι

Fig. 1. Intervals of colony formation of mycobactedum tuberculosis on Loewenstein-Jensen and Ogawa medium in Sputa

Ca5C

2 뉴 On Loe\\"en5tein-

I Je !1 sen mεd ‘ un~

1 I Ascitic fluicl

π

o I

μ

0 :1 Oga、\'a meclium

엠 씨 씨 때

3E ^CSF

~[

2~

I Thorac ic f1 uid 1

^~←」

0 ’ B

'2,

매 삐 삐 패 패

m

_메

W

패

41 ...

50個였고， 0 培地上의 그는

21 ...

30個였￡며， 腦흉 廳被에서는 L-J培地로 分離펀 8例中 5例의 集落數는

1'"

1O{固， 2例의 第落數는 11--20個， 1例는 41--50個였 는데 O培地로 分離된 2例의 集落數는 모두 1-10였다 題水에 서 兩培地로 分離펀 各 11列는 L-J培地의 集落數 는 21"'30個， 0 培地의 는 11--20個였고， 體에 서 兩 培地로 分離된 各 2例는 L-J培地에 서 의 2 例의 集落數 는 모두 11--20個였고， 0 培地에 서 의 2例의 는

1-10

個와 11-20個의 各 1껴j 였다.，*에서는 L-J培地에서의 3例의 集落數는 1-10(固에 2 例， 11-20 個에

lØU

였고，

0 培地에서의 l 1]1J의 는 11-20 個 였다. (第 4 表) L-J培地에서만 分離 培養된 것이 34例였는데

.ê n

階 俠에서 26例 腦촬隨滾이}서 6例， 民에서 2例였고，

L-J

와 O 培地익 兩者에 依하여 요투 합께 分離된 것 이

33

例였는데

.ê O

P:홈{설에 서 26例 題水 關水 및 '*에 서 各

l

例， 腦줍體被과 聽에서 各 2 fJU 였다. (第 5 表)

考 察

6 7

(\\"ι 싸) L-J와 O 培地의 差異點으로서는 L.J培地에는 O 培地 에 들어 있 지 않는

MgS0 4 7H z O , magnesium citrate Flg. 2. Intervals of colony formation of Mycob-

aeterium tuberculosis on Loewenstein-

및 감자 願分이 들어 있 고 표 L-J培地에 는

asparagine

Jensen and Ogawa medium.

이 들어 있는데 O 培地에는

Sodium

glutamate가 들

Table 4. Grades of growth of Mycobacterium tuberculosis on Loewenstein-Jensen and Ogawa mediu :m

from Various Specimens

Grade of growth

Specimens Medium. +

_+十

_(Total)

(Number of Colony)

-10 111-20 \

2님o

^\31-40

14냥o

^[51-60

Sputum L-J

0 ¹⁵

Ascitic fluid L-J 0

0 ⁰

CSF L-J 5

0 ²

Thoracic fl uid L-J 0

0 0

Pus L-J 0

0 ¹

Urine L-J

0

L-J; Loewenstein-J ensen medium Table 5. Growth of Mycobacterium

tuberculo팩g

Specimens |

on 따nwenst

in，~Jen~e~

m-I

~ld

on Loewenste-e1nmO 1g

¹

beanowtsahen m ae-- edlum on1y dillm

26 26

Ascitic fluid 0

CSF 6 ^{ι 。」}

Thoracic fl uid 0 1

Pus 0 2

Urine 2

(Total) 34 33

어 있2..며 이 兩培地에 共有하는 成分으로서

KHzPO ,

glycerin , marachite green

및 鎬펴이다. 量的으로 는 1. J培地보마는 O 培地가 若千 더 많으며 쫓，봉꽤 (ßß 白 이 約

35ml ,

꽤黃이 約 15ml)에 있어 서 는 L-J培地는 全껴을 그대로 넣는데 0:培t번에서는 全펴 (4個)과 꽤黃

(1個)를 넣는다.

이러한 L-J培池와 O 培地에 同一 한前處理方法으로 :處理된 可檢物을 같은 方法무로 I司數의 培地에 接種 培養하여 얻은 成績을 과연 L-J培地上에서의 陽 f生率은

9.5% (67/706)

안데 比하여 O 培地上에 서 의 陽↑生率은

4. 6%

(33/706) 로서 前者의 陽뾰率은 後者의 그 보다 도 2培 以上이나 더 높았무며， 이 현격한 差異는 洗計

12 4 0 3 1 3 52

4 3 2 2 0 0 26

0 0 0 0 0 1

0 1 0 0 0

2 0 0 0 8 0

0 0 0 0 0 2

0 0 0 0 1

1 0 0 0 0

2 0 0 0 0 0 2

1 0 0 o ! 0 0 2

1 0 0 0 0 3

0 0 0 0

0; Ogawa medium

f直의 比較上 有意的안 것이였다.

(D=9. 5-4. 6=4. 9 ,

S， Ed= 、I~.5X91. 5

+

4.6X95.!.=ν18.5

=1. 36 ,

" 7 0 6 706

D 4.9

---_---느 3.60>2， 또

S , Ed 1. 36 . _.

^--~

-, =12.441 ,

自由度

1)

(第

1

表) 이 것 을 可檢物의 種類BIJ로 보면 題水 15例 ， H꽤 水

4í7U

및 體 23例에서는 L-J와 O 培地에서 모두 各各 同-한 陽性率을 나타내였으나 n客댔 546例에서는

L-J

培地上의 陽性率은

9.6%

(52/546) 인데 比해 O 培地上 의 陽{生率은

4.8% (26/546) ,

腦혐隨滾 86例에 서 는

L-J

培地上의 陽性率은

9.2%

(8/96) 인데 比해 O 培地의 것 은

2.3% (2/86) ,

民 32例에 서 는 L-J培地上의 陽注率은

9.4% (3/32)

인데 O 培地의 는

3.1%

(1 /32) 로서

L-J

培地上의 陽性率은 O 培地의 것 보다는 越等하게 높았 는데 이러한 緣由에 對해서는 全혀 알 수가 없다. 結 核園 培養에 있어 서 結核園의 發育條件에 關하여 우리 의 知識은 아직도 쓸弱하다-般的으로 알려져 있는 知識으로서 는

1)

歡素와 웠醒

gas .9-]

分塵

2)

至適週度 와

pH 3)

榮養素

4)

發育f足進 物質파 R且害勳質 等으 혹 -括 할 수 있￡나 이것은 具體的이고 휠統的안 ~O 識이라기 보다는 요히려 斷片的이고 經驗的안 것에 不 過한 것이다. 固形培地上의 發育狀態어l 對하여서도 個 個의 培地上의 發育樣相에 關한 記述은 되어 있어 도 몇 가지 培地어1 對한 發育樣相의 相互 比較 觀察한 報 告는 別혹 없다. 著者들은 이란 點에 훌眼하여 日常的 S로 가장 많이 쓰이는

L-J

와 O 培地上 培養陽

- 2 9 -

性率을 比較하였던 바 L-J培地上에서의 陽↑生率은 O 培 地上의 陽f生率보다 단 높았음을 確認하였다.

集落 形成되기까지의 期間을 週7]IJ로 본 成續에 있 어 서도 L-J培地上에서의 集落 形成 期關을 O 培地上 에서의 그 보다는 約 l週程度로 더 빨랐고 같은 期間 內의 集落 形成도 O 培地에 서 보다는 L-J培地에 서 더 많이 이루어 졌는데 이러한 理由에 對해서도 亦是 推 測할 方法이 없다.

L-J培地와 O 培地上에서 發育한 結核園의 鍵育程度 에 있에서도 L-J培地上에서만 뷰가 있었고， 같은 +에 있어서는 大體료 L-J培地上에서의 集落數는 O 培地上 에서의 그 보다도 더 많았다. 도 L-J培地上에서만 發 育한 것과 L-J培地와 0:培地의 兩者에 함께 發育한 것 이 있었는데 이에 對한 緣由에 關하여서도 얄 길이 없 다.

結 論

￠홈夜 546例， 題水 15例， 腦홉麗波 86例， 뼈水 4例，

體 23例 및 民 32例， 都合 706例의 可檢物을

Loewen- stein-Jensen

培地 706個 Ogawa(小川) 培地 (3%)

706個에 接種 培養하여 얻은 成績은 다음과 같이 要約­

할 수 있었다，

培養 陽性率에 있 어 서 는

Lowenstein - J

ensen培地 에서

9.5% ,

Ogawa培地에서 4.6%로서 前者에서 높 은 陽性率을 얻었고， 集落 形成까지의 期間도

Ogawa

培地에 比해 서

Lowenstein-

Jensen培地에 期間이 짧 았으며， 또한 發育程度에 있어서도 Ogawa培地에서 브다는

Lowenstein - J

ensen培地에 서 더 높았다.

以上의 理由에 서 폴 혜 Ogawa培地보다는

Loewen-

stein培地가 日常的안 結核園 分離培地로서 더 좋다고 생각된마.

參 考 文 홉t

1) Jensen. K. A.;Zbl. Bakt. , 1. Orig. , Kultur d.

Tuberkel-bazillus , 125 , 222 , 1951

2) 小川辰次;結核團檢흉의 基鍵와 應用， 保健同人 社， 東京，

1952 ,

3)

戶田忠雄

:

戶田新細園學， 第 19版

p.354

南 lμ堂，

東京，

1966

- 3 0 -