지터꽤 -엄 떼 빼 熾

째한엄상병리사회지 : 제 14권 제 1 호 1982

1980年 韓國에 서 分離펀

Vibrio

國立保健짧究院 徵生物部

鄭泰쫓·趙敏基·훤짧珠·尹承基

A Study on Vibrio cholerae Isolated in Korea in 1980

T.H. Chung • 1\1.1-\:. Cho

,

Dε꺼artment 01 Aficrobiology in λTIH

=Abstract=

An Investigation was carried out for determinalion of biological characteristics of Vibrio cholerae isolated in Korea in 1980. The results 꺼.-ere summarized as fol1ows:

1. All cultures isolated 、，vere identified as Vibrio cholerae 01 biotype eltor, serotype Inaba, and shov;ed typical biochemical properties.

끽. The is이ates had same agglutination titer against reference a::1다 sera as that of referance stram.

3. LD50 of isolates in mice vγere 8^{" ,}23 organisms.

4. In antimicrobial susceptibility testing by Kirby-Bauer disc ^r.1ethod, Over 90% of cultures ìvere sensitive to tetracycline, gantrisin, chloramphenicol, gentamicin and nalidixic acid.

1. ^{績 論}

우러 나략에 서 는 1969年 콜레 라가 짧소단카 래 11 年만 안 1980年度김1 콜레 라 epidemic삭 았、 었 다. 1980年의

cholera epidemic은 9 月 初부터 全羅南道에 서 짧生하여 대부분 海뿜池域을 따라 거의 全國的으로 傳播되었으 며， 서울을 비옷판 內陣地方에서도 散發的안 愚者짧生

。1 있었다. 原因園은 처음으로 全南 新安都의 愚者로 부터 分離同定되드로서 콜레라로 確認되었고 그추 10

月까지 各地에서 콜레라園。l 分離同定되었다.

國立保健院에 서 는 各地에 서 分離펀 콜레 라園을 萬集 하e:l 이 들 流行園1*에 對한 確認、同定試驗을 흉施하고 마우스어l 對한 病原住 및 抗園藥制에 對한 感受性試驗 等 生物學的 性狀을 把握하였 기 에 그 結果릎 報告하는

바이다.

묘. 試驗材料 및 試驗方法

1. 園樣 ; 1980年 9 月부터 10 月사。1 싹 全투명읍地에서 分離되 어 華集펀 園樣中 100探릎 選擇하여 (Table 1) 實驗에 使用라였다. 對照、휩林로 國立똥建院 01 保有하 고 았는 콜레랴랙신 生塵用園:保 Inaba 35-A-3 및

Ogawa No. 41樣를 便用하였다.

2. 該斷用 血淸: 國立保健院에 서 生좋판 haba 및

Ogawa Serum과 Difco社製 콜레 라 꿇닮띄 월淸을 使 用하였다.

3. ^抗生劃 Disc: BBL社싹 서 製造된 Disc로서 Am- picil1in 等 13種의 抗園햄U Disc를 使用하였다.

4. Bacteriophage : 印度 칼카타에 있는 \VHO cholera phage typing centre로부터 상、讓딸은 :\1 ukerjee group

phage릎 使用하였다.

5. 마우스 : 國立保健昭究院에서 國育되고 갔는 ICR- JCR mouse블 使用하였 다.

6. 生物學的 性狀試驗

- 1 3 -

TabIe 1. Number of cultures tested and it’s origin.

ated area

area cultures

Seoul Kyungki Kangwon Chungnam Kyungbuk Busan Chunnam Jeju Total

24 29 1 1 33 3 6 3 100

1) 生物學的 性狀試驗: 콜레라園을 同定하가 寫한 -般的 生化學的 性狀 試驗으로 Oxidase. IMvic • Sugar fermentation • Arnino acid decarboxylase 等 을 試驗하였다.

2) 其他 生物學的 性狀試驗: 數種의 特練培地에 서 의

發育性狀• 溶血 맞 血球 癡集反應， Mukerjee phage

group N에 對한 感受性을 試驗하였 고， 各種 抗園鄭j어l 對한 感受性 試驗은 Kirby-Bauer Disc方法어l 짜랐다.

마우스에 對한 園力 試驗운 Heart infusion寒天培地어l 18時間 培養된 園林를 5% mucin어l 浮遊시 켜 精釋段 階別로 0.5ml씩 10首의 마우스 臨뽑內에 接種하고 3 日 間 觀察하여 LD50를 計算하였 다.

癡集原 및 擬集力 試驗은 國立保健院에 서 生塵된 Crude cholera antiserurn을 分離園林로 吸收시 쳐 f疑集 原을 確認、하고 擬集力을 보았다.

ill. 試驗成績

1. 生化學的 性狀은 Table 2에 서 보는 바와 같이 典型 的안 V ibrio cholerae의 性狀을 나타내 었 다. 요든 園樣 가 gI ucose. sucrose. rnannose 等을 分解하고 arabinose 를 分解하지 않는 Heiberg group 1 에 屬하였고， 3%

NaCl야 含有펀 培地에 서 發育이 잘 되 었 다.

2. 후血球의 樓血試驗에 서 는 Table 3에 서 보는 ll}와 같이 全 園i*가 溶血陰性 反應을 보였으며， 닭血球癡 集에 서 는 陽性을 보였고， MacConkey Agar에 서 全 園 i*가 發育되 었다. 또한 85% 가 string test에서 뷰를 나 타냈고 22⁰C의 培養에서 v-p가 全園i* 陽性反應을 보 였다.

3. polymixin-B에 對해 서 는 100林모두가 Resistant 했 으며 Mukerjee phage group N에 對해 서 도 모두 Resistant하였 다. 이 로서 biotype El-Tor이 라는 것 이

Table 2. Biochemical properties of V. cholerae- Isolated in Korea 1980(100)

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K.LA H2S Indophenol

oxidase catalase Indol Methyl Red V-P(37⁰C) S-citrate Lrea I-\:CN rnotility (Hanging drop)

Lγsine

Arginine Ornithine phenylalanine rnalonate O-F test Glucose Gas frorn Sucrose rnannose Arabinose Lactose mannitol Inositol Growth on

0% NaCl 3% NaCl 6% NaCl 9% NaCl 11% NaCl Cholera-Red

reaction Jordan’s

tartrate Gelatin

liquefaction

100 100 100 0 100 100 O 100 100 100 O 100

O O F (100) 100

o

100 100

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(100) 100

0

100 100 O O O

100 100 100

100 100 100 67 96.4 72

0 80 97.5 100

0 100 0 70 F (100)

100 0 100 100

。

(~9)

100 0 100 100

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100 100 :ffi0

K/A

+ + +

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確認될 수 있었다.

4. 分離된 모든 훌훌i*는 sIide癡集反應으로 Inaba型업 이 確認되고 Table 4에서 보는 바와 갇이 吸收試驗에 서 도 標準園林와 같은 癡集力을 가진 Inaba 癡集原융­

갖고있음을 알 수 있었다.

5. 마우스에 對한 園力은 Table 5에 서 보는 바와같 - 1 4 -

Table 3. Biological Characteristics of V. cholerae Isolated in Korea (1980)

Substrate or test c1assic 35-A-3

Growth on S. S. agar Mac Conkey Brilliant Green Bismuth Sulfite cetrimide

Tube haemolysis (Sheep R.B.C.) Haemagglutination (chicken cell) V-P (22⁰C 48hrs.)

Polymyxin B Susceptibility String test 什

十

Percent positive culture 1" ,100

0 100 90 50 O O 100 100 Resistant(100)

85 15

Biotype eltor (NCDC U.S)

0 61. 5 38.5 7.5

+ + +

71.3 87 100 Resistant(100)

77 23

+

Sensitive

-tt

Table 4. Agglutinability of 10 cultures of V.

cholerae biotype eltor.

320 1280 320

K80-4 1280 1280 320

K80-5 Daiduk 1280 1280 320 K80-6 Mokpo 1280 1280 320 K80-7 jeju 1280 1280 320 ~

1280 ^• K80-8 Dalsung 2560

Ii80 9 lnchun j ¹²⁸⁰ 1잃O ^{j 320} K80-10 I Sokcho 1280 1280 320

Ogawa No.41 1280 I ³²⁰

Inaba 35- A-3 320 j

이 LDso 가 8rv23 Organisms이 였 다.

6. 抗園뽑j어l 對한 感受↑生 結果는 Table 6에 서 보는 바와갇이 많은 藥簡j에 對해 서 感受性을 보였 으며 Am- pic i11in에 感受性이 있는 園林가 89林였고， Tetracy- cline에 93林， Gantrisin에 99妹， Chloramphenicol에 97林， Gentamycino1] 93林， Nalidixic acid에 96林가 感受性이 있는 것 으로 나타났다. Kanamycino1] 는 57 林가 感受性이 있었고， 43樣는 中等度의 感受性을 보 였으며 streptomycÌn에는 5林만이 感受性이 있었고 95 tt-가 中等度의 感受性을 보였 다. 훌휠簡j에 對해 高度로 耐性이 있었던 園姓는 하나도 없었다. 다만 polymixin -B와 colistin에 는 全園林가 耐性을 보였 다.

Table 5. Virulence of V. cholerae biotype eltor isolated in Korea. (LDso in mice)

Strain No. !LD5o in Micel

|

K80-1 8 Sinan

K80-2 23 Koyangkun

K80-3 8 Seoul

K80-4 14 Busan

K80-5 10 Boryungkun

K80-6 14 Mokpo

K80-7 12 jeju

K80-8 8 Dalsungkun

Table 6. Drug Susceptibility of V. cholerae elsolated in Korea (100 cultures)

By Kirby-Bauer Disc

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N. 考 按

Vibr:o cholerae의 分離同定은 園이 가지고 있는 特

~↑生씌운어1 比較的 다른 細園同定에서 보다 簡單하다 할 수 섰 다. Alkaline peptone water에 서 짧윤 時間內 에 增평이 되 며 TCBS나 미 연 -32 등 選擇的안 培地에 發育이 ;살 되 는 펀。l 고 colony도 찰 區5J1j 이 되 지 만 콜레 라휩도 TCBS 냐 마 연 -32培地上에 서 f대制되 는 경 우도 많다는 點과 Sucrose블 分解하는 V. cholerae가 아닌 다 른 園種도 TCBS 냐 며 연 -32 培地에 서 colony흘 形成

하는 것이 있다는 點을 考慮해야 한다. 1.대制力이 꿇한 培地에/:~ 發育된 園들은 그들이 가지고 있는 본래의 生物學的 特性의 變化릎 일￡킬 수 있다는 點도 考慮 하여 빼制要素가 含有되 지 않은 營養培地에 繼代하여 使用래야 한다.

1963年 및 1969年度에 流行랬 던 콜레 라와 1980年에 流行한 콜레 라는 모두

o

한 biotype El-Tor사 었 다. V. cholerae의 classic과

EI-Tor biotype은 그들이 가지 고 있 는 몇 가지 生物學 的안 特뾰에 依해서 決定되는데， 후血球 hemolysis test, 닭血球 agglutination test, V -P test, polymixin- B susceptibility test, phage typing 等아 많이 利用 되고 있다. WHO의 近來 記錄에 依하면， 近來에 分離 되 는 EI-Tor콜레 라園들은 sheep RBC hemolysis陰性인 것이 增加되고 았다하며 EI-Tor biotype을 決定하는 試驗으로 利用될 수 없게 되 었다. 實際로 1963年에 우 러 나라-에 서 分離된 EI-Tor콜레 라園은 천부 hemolysis

陽性이 였 으켜 1960年代에 東南亞에 서 分離된 EI-Tor 園林들어1 對한 美國 CDC의 試驗結果에서도 71. 3% 가 hemolysis 陽性 (Table 3) 이 었으나 1980年 우리 나라에 서 分離된 EI-Tor園~는 全部가 hemolysis陰{生이 었 다.

EI-Tor biotype을 確實하게 決定할 수 있 는 試驗은

polymixin-B에 對한 Susceptibility test와 lVlukerjee phage (group N) 에 對한 susceptibility test이 다.

1980年 우러 나라에 서 分離된 V. cholerae의 癡集原 응 백신生塵用 標準園林와 差異가 없었으며 이로서 콜 레라園을 同定하는 過程을 알선에서도 slide 癡集反應 試驗에서 쉽게 찾아낼 수 있게 되었다. 分離된 園林의 마우스에 서 의 園力은 LDso가 8^,,-,23 organisms 이 였 으 나 이 는 반복펀 實驗의 統計的 處理結果가 아니 고 單­

試驗의 結果 :)1 거 해 문에 보다 많은 試驗。l 結合되 어 야 할것 이 다. 抗園빼어1 對한 感受↑生 試驗結果 Gantricin

Chloramphenicol • Tetracycline • Gentamicin 等에 大 部分 團林가 (93% 以上) 感受많아 있는 것으로 나타났 으냐 愚者의 治擾와 據防에 있 어 서 臨 w的으로 그 效 果測定이 어려워 正確한 藥效릎 斷言하기는 어렵다 하 겠다.

V. 結 果

1980년 우러 나라 콜레 하 流行地域에 서 分離펀 1001*

의 V. cholerae에 對한 生物學的 f生狀을 檢討한 바 다 음과 같은 結果를 얻었다.

1. 1980年 우리 나라에 流行깐 콜레 라園은 모두 Vibrio cholerae 01에 屬하는 biotype EI-Tor探르 Serotype

lnaba 였다.

2. 分離園.1*들은 모두 짧型的안 生化學的 性狀을 가 지고 있었다.

3. 分離휩洙늘 모두 랙 신 生옳用 標準題i*와 同等한 擬集力을 가지고 있었다.

4. 마우스에 對한 園力은 LDs07} 8"-'23 organisms

이었다.

5. Kirby-Bauer disc方설꽉 썼한 抗園齊j感受性 試驗 結果는 Te~racγcline • Gantricin • Chloramphenicol • Gentamicin 풍에 90% 以上 感受性을 보였 으며 , coli-

stin파 poh-mixin-B에 는 100t4:‘ 도두 耐性을 나타냈 마.

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