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n on - c ont ac t ty pe

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Academic year: 2021

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(1)

생 쥐 수 정 란 의 보 조 부 화 술 에 있 어 서 n on - c ont ac t ty pe 인 diode las er의 이 용

을지병원 의과학연구소1, 산부인과2, 대전을지대학병원 산부인과3, 건국대학교 축산학과4 김 동 훈1, 이 명 섭3, 강 희 규1, 한 성 원1, 김 묘 경1, 박 원 일2, 이 훈 택4, 정 길 생4, 이 호 준1

U s e o f N on - Cont ac t T y pe D iode L as e r on A s s is t e d H at c hin g of M ou s e E m bry o s

D .H . K im1, M .S . L e e3, H .G . K an g1, S .W . H an1, M .K . K im1, W .I. P ark2, H .T . L e e4, K .S . Ch un g4 an d H .J . L e e1

M edical S cien ce In stitu t e1 an d OB/ GYN2 of E ulji Gen er al H ospit al, OB/ GYN of E ulji M edical Colleg e H ospit al3 an d Depar t m ent of A nim al S cien ce, K on - Ku k Univ er sit y4

A b s trac t

T h e pr e sen t st u dy w a s p er for m ed t o inv e st ig at e t h e efficacy an d safet y of la s er a s sist ed h at ch in g (A H ) on m ou se em b ry os . N on - con t a ct 1.48 ㎛ diode la ser sy st em u sed t o cr eat e a pr ecise h ole on zon a pellu cida . 2- cell em br y os w er e collect ed fr om t h e m ice (ICR ) t h at h ad t h e coit u s v agin al plu g con fir m ed at 48 h ou r s aft er h CG inj ect ion . Collect ed 2- cell em b ry os w er e cu lt ur ed in t h e H T F m ediu m supplem en t ed w ith 0.4% BS A . F or ex per im en t s , em b ry os at 8 - cell st ag e w er e u sed aft er 18- 22 h ou r s in cultu r e. A ft er a s sist ed h at chin g , t h e em br y os w er e fu rt h er cu lt ur ed in HT F m ediu m cont ainin g 0.1% P VP (an ti - h at chin g sy st em ) for 3 day s . F or ev alu at e efficien cy of la s er on m ou s e em b ry o h at chin g , t h e effect of A H m eth od s (acidic ty r ode , pr on a s e an d la ser ), t h e nu m b er of art ificial h oles (1, 2 an d 3 h ole ) an d t h e ir r adiat ion t im e of la ser (2, 4, 6, 8 an d 10 m s ) w er e ex am in ed . H at chin g r at e s of la ser A H gr oup (95.2% ) w a s sig nifican tly high er t h an t h at of cont r ol g r ou p (50.8% ), bu t t h er e w a s n o differ en ce s am on g t h e la ser (95.2% ), acidic t y r ode (100% ) an d pr on a se (98.5% ) g r ou p s . H at chin g r at es of th e nu m b er of zon a p ellu cida op enin g by la s er , t h er e w a s n o differ en ces am on g th e 1 h ole (87.5% ), 2 h ole (92.1% ) an d 3 h ole (85.9% ) gr oup s . Dev elopm ent al an d h at ch in g r at es of em br y os accor din g t o la s er ir r a diat ion tim e w er e sim ilar in th e tr eat m en t gr oup s . T h er efor e, t h es e r e sult s su g g e st t h at la s er A H u sin g n on - cont act 1.48 ㎛ diode la ser is a sim ple an d accu r at e an d effectiv e pr ocedu r e for A H . Ba sed on th ese r esult s , la ser A H cou ld b e u se safely for h um an A RT pr ogr am .

K ey w ord s : laser as sisted hatchin g , 1.48 ㎛ diode laser , anti- hat ching sy st em .

(2)

서 론

투명대로 부터 배반포의 부화는 인간을 포함한 포유동물의 발생에 있어서 하나의 중요한 과정이 다. 만약 배반포가 자궁의 im plant ation w in dow 시간 내에 부화를 하지 못한다면 임신이 성립될 수 없기 때문이다. 수정란의 부화율이 저하되는 원인으로서는 비정상적인 투명대의 경화현상 (Cohen et al., 1990; Coh en , 1991; T u ck er et al., 1991), 증가된 투명대의 두께 (Coh en et al., 1992) 그리고 투 명대를 용해시키기 위해 수정란 자체에서 분비되는 en zym atic ly sin의 부족 (Coh en , 1991; Cohen et al., 1992a ; Kh alafa et al., 1993 ; S ch iew e et al., 1995)에 기인한다고 보고하고 있다. 이러한 투명대 로 부터 야기된 수정란의 부화의 문제점을 해결하기 위하여 수정란의 투명대를 인위적으로 조작하는 보조부화술이 방법이 이용되고 있다. 보조부화술의 방법으로는 투명대의 일부를 절개하는 partial zon a dis section (Coh en et al., 1990; Coh en & F eldb er g , 1991; T u ck er et al., 1991), acidic t y r ode용 액을 이용하여 투명대의 일부에 구멍을 내는 zon a drillin g (Coh en et al., 1992a ), 그리고 en zy m e용 액에 수정란을 침지하여 투명대를 용해시키는 zon a thinning (Gor den & Dapunt , 1993a,b ; Lee et al., 1997)과 같은 방법이 이용되어져 왔다. 그러나 m icr om anipu lat or 를 이용하는 par t ial zon a dis s ect ion이나 zon a dr illin g 방법의 경우, 숙달된 기술이 필요하며, 또한 동일하고 규격화된 크기로 투명대를 뚫는데 어려움이 있다 (Germ ond et al., 1995).

이러한 문제점을 극복하기 위한 대안으로 la ser를 이용한 보조부화술이 제시되었다 (T adir et al., 1991). 지금까지 다양한 종류의 la s er 가 생쥐 (Blan ch et et al., 1992; N eev et al., 1993 ; S chiew e et al., 1995 ), 소 (S chu t ze et al., 1994 ) 그리고 인간 (S tr ohm er & F eich tin g er , 1992; A nt in or i et al., 1996a ; A nt in or i et al., 1996b )의 수정란 투명대에 h ole을 만들기 위하여 이용되어져 왔다. 몇몇 보고 자들은 gla s s pipette이나 optical fiber와 같은 laser를 유도하는 관이 필요한 cont act type sy st em 을 이용하였는데 (Str ohm er & F eichtin ger , 1992; Obruca et al., 1994), 이 sy st em 은 숙련된 기술이 필 요하며, pipett e이나 fiber를 소독해야 하는 단점으로 인하여 그 효용가치가 크게 인정되지 않았다.

그러나 최근에 las er 유도관이 필요없이 현미경의 대물렌즈에서 직접 la ser가 방출되어 수정란의 조 작시간이 단축되고, 조작이 간편한 non - cont act type sy st em 이 이용되고 있으며, 유용한 것으로 보 고되고 있다 (N eev et al., 1993; Germ ond et al., 1995; S chiew e et al., 1995).

이에 본 연구는 생쥐 수정란을 이용하여 n on - contact type인 diode laser를 이용한 보조부화술이 배반포의 부화에 효과적인가를 조사하고, 또한 이상의 결과를 바탕으로 인간의 생식보조술에 응용을 위한 기초자료로 이용하는데 그 목적이 있다.

재 료 및 방 법

1 . 수 정 란 의 준 비

본 실험에는 5- 6주령된 ICR계통의 자성 생쥐를 이용하였다. 생쥐의 복강 내에 5 IU의 PM S G를 주사한 다음, 48시간 후에 5 IU의 hCG를 주사하여 과배란 유도를 하였으며, 수정란을 획득하기 위 하여 웅성 생쥐와 1:1의 비율로 합사시켜 교미를 유도하였다. h CG 주사 후 48시간째 경추탈골법을 이용하여 생쥐를 도살한 후, 적출된 난관에서 난관관류법을 통하여 2세포기의 수정란을 회수하였다.

회수된 2세포기 수정란은 0.4% BSA가 첨가된 HT F 배양액에서 배양을 실시하였으며, 인간의 보조생 식술에 있어서 보조부화술 시술과정과 동일하게 하기 위하여, 배양 18- 20시간째 8세포기로 발달된 수정란 만을 선별하여 실험에 이용하였다.

(3)

2 . 수 정 란 의 보 조 부 화 (A s s i s t e d h at chin g )

1 ) L a s er

본 실험에서는 n on - contact type의 diode laser sy stem (F ertilase, M T M M edical T echn ology , S w it zer lan d )을 이용하였다. la ser sy st em 에 대하여 간단히 설명하면, 670 n m diode la s er aim in g b eam 과 collim at ed 1.48 ㎛ cw la s er b eam 이 반사경을 통하여 도립현미경으로 운반되고, 다시 la ser b eam 은 현미경 대물렌즈 (x 45 )를 통하여 빛을 방출하게 됨으로서, 배양접시를 투과하여 수정란의 투 명대에 hole을 형성하게 된다. 그리고 hole의 크기는 조사시간 (irr diation tim e)을 조정함으로써 조절 이 가능하다. as sist ed hatchin g (AH )를 실행하기 위하여, 8세포기의 수정란 (5- 10개)을 m in er al oil 이 피복된 20 ㎕의 HT F - Hepes배양액 소적에 옮긴 후, 배양접시를 현미경의 stag e에 위치시켰다. 그 리고 현미경의 stag e를 이동시켜 수정란의 투명대에 laser의 촛점을 맞춘 후, las er를 조사해서 AH 를 실시하였다 (F ig . 1).

2 ) A cidic ty rode

8세포기의 수정란 (3 - 5개)을 m in er al oil이 피복된 20 ㎕의 HT F - H epes배양액 소적으로 옮긴 후, 배양접시를 m icr om anipulator에 위치시켰다. 한 개의 수정란을 h olding pipett e으로 고정시킨 후, 3시 방향에서 acidic tyr ode용액이 함유된 pipett e을 이용하여 acidic tyr ode용액 (pH 2.3)을 수정란의 투 명대에 천천히 방출함으로서 A H를 실시하였다.

3 ) P ron a s e

수정란의 투명대를 thinnin g시키기 위하여, 1μg/ m l pr onas e (P - 8811, Sigm a )가 첨가된 HT F 배양 액에서 8세포기 수정란을 3일간 배양을 실시하였다.

3 . 수 정 란 의 배 양

각기 다른 방법으로 보조부화술을 실시한 수정란은 보조부화술의 효과를 보다 확실하게 살펴보기 위하여, A likani와 Cohen (1992)의 방법에 준하여 ant i- h a t ch in g cu lt ur e sy s tem , 즉 pr ot ein - fr ee배양 액에서 수정란을 3일간 배양을 실시하였다. 한편 수정란이 배양접시에 부착되는 것을 방지하기 위하 여 pr otein 대신에 0.1% PVP를 첨가하였다. 수정란의 발달상태는 12시간 간격으로 관찰하여 조사하 였다 (F ig . 2).

4. 실 험

생쥐 수정란에 있어서 laser 보조부화술의 효과를 알아보기 위하여 1) 보조부화술 방법에 따른 부화율을 비교하였고, 2) las er 보조부화시 투명대의 h ole수에 따른 부화율을 비교하였고, 3) las er 조 사시간 (irradiation tim e)에 따른 발달율과 부화율을 조사하였고, 4) 보조부화술 방법에 따른 배반포 의 부화시간을 비교 관찰하였다.

5 . 통 계 처 리

본 연구에서 얻어진 모든 실험자료의 통계처리는 χ2 검정을 실시하여, P < 0.05 이하의 유의성 만 을 대조구와 처리구간의 통계학적 차이로 인정하였다.

(4)

결 과

1 . 보 조 부 화 술 방 법 에 따 른 부 화 율

보조부화술 방법에 따른 생쥐 수정란의 발달율과 부화율을 조사한 결과는 T able 1에 제시한 바 와 같다. 배반포까지의 발달율에 있어서는 대조군과 보조부화술군 간에 차이가 나타나지 않았지만, 부화율에 있어서는 acidic tyrode군 (100% ), Pr on ase군 (98.5% ), laser군 (95.2% )이 BSA 대조군 (73.3% )과 P V P 대조군 (50.8% )보다 유의하게 높은 부화율을 나타냈다. 그러나 보조부화술 방법 간에 는 유의한 차이가 나타나지 않았다. 이 결과를 통하여, anti- hat chin g sy st em 에서 보조부화술이 배반 포의 부화에 유효함을 알 수 있었으며, 또한 la ser 보조부화술도 효과적임을 확인할 수 있었다.

T able 1. H at chin g r at e s accor din g t o a s sist ed h at chin g m eth od s .

N o.of N o.(% ) of em br y os dev eloped t o M eth od em br y os

cu lt ur ed M or ular Bla st ocy st H at chin g - BL*

Cont r ol (B S A )* * 60 60 (100) 59 (98.3) 44 (73.3 )a , Cont r ol (P VP )* * * 61 61(100) 60 (98.4 ) 31(50.8 )a A cidic ty r ode* * * 66 66 (100) 66 (100) 66 (100)b

P r on a se* * * 65 65 (100) 65 (100) 64 (98.5)b

La ser* * * 63 63 (100) 63 (100) 60(95.2)b

* H at ch in g bla st ocy st

* * E m br y os w er e cultu r ed in H T F s upplem en t ed w ith 0.4% B S A .

* * *

E m bry os w er e cultu r ed in H T F cont ainin g 0.1% P V P .

a ,b : P <0.05

2 . L a s e r 보 조 부 화 술 시 투 명 대 의 h ole수 에 따 른 부 화 율

L a s er 보조부화술을 시행하는데 있어서 투명대 상의 h ole수에 따른 생쥐 수정란의 발달율과 부화 율을 조사한 결과는 T able 2에 제시한 바와 같다. 배반포까지의 발달율은 hole수에 따른 차이가 나 타나지 않았으며, 부화율에 있어서도 차이가 인정되지 않았다. 따라서 las er를 이용한 보조부화술에 있어서는 투명대 상에 1개 이상의 h ole은 배반포의 부화에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.

(5)

T ab le 2. H at chin g r at es accor din g t o n um b er of zon a pellu cida open in g by la ser .

N o.of N o.(% ) of em br yos dev eloped t o

H ole n um b er em br y os

cu lt ur ed M orular Bla st ocy st H at chin g - BL*

Cont r ol (B S A )* * 57 57 (100) 54 (94.7) 41(71.9 )a ,b

Cont r ol (P VP )* * * 56 55 (98.5) 47 (83.9 ) 29 (51.8 )a

1 h ole* * * 64 64 (100) 63 (98.4) 56 (87.5 )b

2 h ole* * * 64 63 (98.4 ) 62 (96.9 ) 59 (92.1)b

3 h ole* * * 64 64 (100) 61(95.3) 55 (85.9 )b

* H at ch in g bla st ocy st

* * E m br y os w er e cultu r ed in H T F supplem en t ed w ith 0.4% B S A .

* * *

E m br y os w er e cultu r ed in H T F cont ainin g 0.1% P VP .

a ,b : P < 0.05

3 . L a s e r조 사 시 간 (irra diation tim e )에 따 른 발 달 율 과 부 화 율

L a s er 보조부화술을 시행하는데 있어서 la s er 조사시간에 따른 생쥐 수정란의 발달율과 부화율을 조사한 결과는 T able 3에 제시한 바와 같다. laser 조사시간을 2~10 m s로 조절을 하여 보조부화술 을 시행한 결과, 조사시간이 증가되어도 수정란의 배반포까지의 발달율에 유해한 영향을 미치지 않 는 것으로 나타났으며, 부화율에 있어서도 laser 조사시간이 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.

이러한 결과를 고려해 볼 때, 2~10 m s 시간은 수정란에 무해한 것으로 판단되며, 특히 4 m s의 조 사시간이 결과상으로 볼 때 가장 적합한 것으로 생각된다.

T ab le 3. H at chin g r at es accor din g t o irr adiation tim e of la s er .

N o.of N o.(% ) of em b ry os dev elop ed t o Irr adiation em br y os

tim e (m s ) cu lt ur ed M oru lar Bla st ocy st H at ch in g - BL*

Cont r ol (B S A )* * 61 61(100) 59 (96.7) 46 (75.4 )a ,b Cont r ol (P VP )* * * 62 62 (100) 62 (100) 26 (41.9 )a

2 m s* * * 61 61(100) 60 (98.4 ) 57 (93.4 )b

4 m s* * * 66 66 (100) 65 (98.5 ) 64 (97.0)b

6 m s* * * 62 62(100) 62 (100) 60 (96.8 )b

8 m s* * * 63 62(98.4 ) 59 (93.7) 57 (90.5 )b

10 m s* * * 63 63 (100) 61(96.8 ) 60 (95.2)b

* H at ch in g bla st ocy st

* * E m bry os w er e cultu r ed in H T F s upplem en t ed w ith 0.4% B S A .

* * *

E m br y os w er e cultu r ed in H T F supplem en t ed w ith 0.1% P VP .

a ,b : P < 0.05

(6)

4 . 보 조 부 화 술 방 법 에 따 른 배 반 포 의 부 화 시 간

보조부화술 방법에 따른 생쥐 배반포의 부화시간을 조사한 결과는 F igur e 3에 제시된 바와 같다.

a cidic ty r ode군과 la ser 군은 h CG 투여 후 102시간째에 배반포의 약 40% 가 부화를 시작하였으며, 126시간째 대부분이 부화를 완료하였다. 이에 반하여 pr on a s e군과 대조군은 102시간째에는 부화를 시작한 배반포가 전혀 없었으며, 114시간째에 pr onas e군이 약 40% , 대조군은 약 15% 정도가 부화를 시작했으며, 부화의 완료는 pr onas e군이 138시간째, 대조군은 150시간째에 이루어졌다. 이 결과를 살 펴볼 때, 투명대 상에 hole을 만들어주는 보조부화술이 보다 빠른 부화를 유도한다는 것을 알 수 있 었으며, las er를 이용한 방법이 빠른 부화를 유도하는데 효과적임을 알 수 있었다.

(7)

고 찰

배반포의 부화율을 증진시키기 위한 보조부화술에는 화학적 (Cohen et al., 1992) 혹은 기계적 방 법 (Cohen et al., 1990, T u cker et al., 1991)이 이용되어져 왔다. 그러나 이러한 방법은 숙련된 기술 이 요구되며, 또한 수정란을 장시간 외부에 노출시켜야 하며, 원하는 크기의 정확한 구멍을 낼수 없 다는 문제점이 지적되어왔다. laser를 이용한 보조부화술은 기존 방법의 대안으로서 제시되었으며 (T adir et al., 1991), 다양한 종류의 la ser 가 이용되고 있다. 보조부화술에 이용되는 la ser sy st em 은 cont act 와 n on - con t act t y pe으로 대별할 수 있다. con t act t y pe은 g la s s pipet t e이나 fib er 와 같은 la ser 유도관에 의하여 빛이 방출되는 형태이며, ar g on flu or ide la ser (L au fer et al., 1993), E r :YA G la ser (S t r oh m er & F eicht in g er , 1992; Obr u ca et al., 1994; A nt in or i et al., 1996 ; Obr u ca et al., 1997 ), N d :YA G la ser (Coddin gt on et al., 1992)가 주로 이용되었다. 그러나 m icr om anipu lat or를 이용 한 보조부화술과 마찬가지로 시간적 그리고 기술적 문제로 인한 단점 때문에 큰 효용가치가 인정되 지 않았었다. contact type의 단점을 극복하기 위하여 개발된 non - cont act type은 빛을 유도하는 유 도관이 필요없이 현미경의 대물렌즈를 통하여 빛이 방출되는 형태이며, krypton fluoride ex cim er la ser (Blan ch et et al., 1992), XeCl ex cim er la s er (N eev et al., 1993 ), H o :Y S GG la ser (S chiew e et al., 1995), diode la ser (Germ on d et al., 1995 ), UV la ser (A nt in or i et al., 1996 )가 이용되고 있다. 한 편, 수정란에 laser를 이용할 때 고려되어야 할 사항은 1) 열에 의한 부작용이 완전히 배제되여야 하 며, 2) DNA흡수 범위에서 벗어난 파장을 이용함으로서 유전적 손상을 방지해야 하며, 3) 기계적 손 상을 최소화하고 정확도를 기하기 위하여 융제역치 (ablation threshold )가 작아야 하며, 4) 장치가 간결하고 조작이 손쉬워야 한다는 것이다 (Obruca er al., 1994). 특히 non - cont act type에서는 빛이 목표물체에 도달하기 위하여 배양접시와 배양액에 의하여 흡수되는 것이 최소화되어야 한다 (Germ on d et al., 1995 ). 몇몇 연구자에 의하면 308 n m ex cim er la ser는 염색체상의 이상 뿐만 아니 라 수정란의 비정상적인 발달을 다소 증가시키며 (Vir sick - P euckert et al., 1992; N eev et al., 1993), 248 n m Kr F ex cim er la ser 는 수정란의 발달을 다소 억제시키며 (Blan ch et et al., 1992), 또한 UV 범위의 파장은 유해한 m ut ag enic effect를 유발할 수 있는 가능성이 있다고 보고하고 있다 (K och ev ar , 1989). 그러나 본 실험에 이용된 diode la ser는 1.48 ㎛ 파장으로서 물의 흡수 스펙트럼 (약 2900 nm ), DN A 흡수 스펙트럼 (약 300 nm ) 그리고 단백질 흡수 스펙트럼 (약 308 n m ) 범위에 서 크게 벗어나 있어서, 수정란의 체외 및 체내 발달에 유해한 영향을 미치지 않는 것으로 보고되고 있다 (Germ ond et al., 1995; Germ ond et al., 1996).

본 실험에서 보조부화술 방법에 따른 부화율을 비교한 결과, 방법들 간에 수정란의 발달 및 부화 에 있어서 유사한 결과를 나타냈다. 보조부화술을 시행한 각 처리군의 수정란들을 부화를 억제시키 기 위하여 pr otein - fr ee 배양액에서 배양을 했지만, 대조군 뿐만 아니라 prot ein을 첨가한 대조군보다 도 유의하게 높은 부화율을 나타냈다. 그리고 S chiew e 등 (1995)에 의하면 anti- h atchin g sy st em 에 서 배양된 생쥐 수정란에 laser 보조부화술을 시행하여 이식했을 때, 대조군에 비하여 유의하게 높은 착상율을 나타냈으며, pr ot ein이 첨가된 배양액에서 배양된 수정란과 유사한 착상율을 나타냈다고 보 고하고 있다. 따라서 la ser 보조부화술은 수정란의 발달에 무해하며, 부화에 있어서도 유효한 것으로 생각된다. 부화시간을 비교한 결과는 laser군과 acidic tyr ode군이 prona se군과 대조군보다 빠르게 부 화가 시작되는 것으로 나타났는데, 이것은 충분한 배반포의 팽창과 투명대의 thinnin g이 없이도 뚫어 진 투명대의 구멍으로 부터 부화가 가능하기 때문이며, 따라서 부화된 배반포의 투명대 형태를 살펴 보면 대조군보다 두꺼운 상태를 유지하고 있음을 알수있다.

Coh en 과 F eldb er g (1991)에 의하면 acidic ty r ode를 이용한 보조부화술에서 투명대에 2개 혹은 3 개의 hole을 만드는 것이 부화에 보다 효과적임을 보고하고 있다. 따라서 la ser 보조부화술에 이 방 법을 도입한 결과, 1, 2, 3hole군 간에 경향성을 찾을 수는 없었지만, 수치적으로 2hole군이 다소 높

(8)

은 결과를 나타냈다.

1.48 ㎛ diode la ser 는 투명대 gly copr ot ein m at r ix 를 열에 의하여 국소적으로 파괴함으로서 구멍을 뚫게 되는데 (N eev et al., 1993), 구멍의 크기 조절은 조사시간 (irr adiation tim e)을 조절함으로써 가 능하다. 따라서 laser 보조부화술에 있어서 조사시간과 구멍크기는 수정란의 발달과 부화에 있어서 중요한 부분이라고 볼 수 있다. 본 실험에서 조사시간에 따른 수정란의 발달과 부화율을 비교한 결 과, 2~10 m s의 조사시간은 수정란의 발달 및 부화에 큰 차이가 없는 것으로 나타났다. 그렇지만, 실험을 수행하면서 느낀 경험으로는 4 m s의 조사시간이 보조부화술에서 가장 적합한 것으로 알려져 있는 할구 절반정도의 크기인 약 10 ㎛ 크기의 hole을 만들므로 생쥐 수정란의 보조부화술에 적합하 다고 생각한다.

본 실험 결과를 종합해 볼 때, 보조부화술에 있어서 non - cont act type인 diode las er의 이용이 수 정란의 발달에 유해한 영향을 미치지 않으며, 부화율을 유의하게 향상시키는 것을 알 수 있었다. 또 한 다른 보조부화술과 비교했을 때, 보다 간편할 뿐만 아니라 작업시간을 크게 단축시킴으로서 수정 란의 외부노출시간을 최소화 시킬수 있었다. 이러한 결과를 기초로 인간의 보조부화술에도 las er가 유용하게 이용될 수 있을 것으로 생각되며, 또한 착상전 유전진단을 위한 할구 및 극체의 생검에 까 지 그 이용범위를 넓힐 수 있을 것으로 사료된다.

결 론

본 연구는 생쥐 수정란의 보조부화술에 있어서 laser의 이용이 배반포의 부화에 효과적인가를 조 사하기 위하여 실시하였으며, 다음과 같은 결과를 얻었다.

1. la s er 처리군이 대조군보다 유의하개 높은 부화율을 나타냈다.

2. 보조부화술 방법에 따른 배반포의 부화율은, 방법 간에 차이가 나타나지 않았다.

3. la s er 처리시 h ole수에 따른 배반포의 부화율을, 처리군간에 유의한 차이를 나타내지 않았다.

4. la s er 조사시간에 따른 수정란의 발달율과 부화율은, 처리군간에 유의한 차이를 나타내지 않았다.

5. la ser 처리군과 acidic t y r ode처리군이 대조군과 pr on a se처리군에 비하여 부화시간이 빠른 경향을 나타냈다.

이상의 결과로 볼 때. laser를 이용한 보조부화술은 생쥐 수정란의 발달에 무해하며, 부화율을 향 상시키는 것으로 나타났으며, 또한 다른 보조부화술에 비하여 작업시간이 매우 빠르며, 원하는 부위 를 정확하게, 원하는 크기만큼 구멍을 낼수 있다는 장점이 있다. 따라서 사람의 생식보조술에도 la ser 보조부화술은 매우 유용한 방법이 될수 있을 것으로 사료된다.

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참조

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