Inhibitory Effects of Terminalia chebula, Sanguisorba officinalis, Rubus coreanus and Rheum palmatum on Hepatitis B Virus Replication in HepG2 2.2.15 Cells

약학희 지 제 43 권 제 4 호 458~463(1999) Yakhak Hoeji Vol. 43, No. 4

HepG2 2.2.15 세포주를 이용한 가자, 지유, 복분자, 대황의 B형 간염바이러스 증식 억제 효과

김 태 균 • 박 민 수 •한 형 미 •강 석 연 • 정 기 경 •류 항 묵 • 김 승 희 *

식 품 의 약 품 안 전 청

(Received May 10, 1999)

Inhibitory Effects of

and

on Hepatitis B Virus

Replication in HepG2 2.2.15 Cells

Tae Gyun Kim, Min Su Park, Hyung-Mee Han, Seog Youn Kang, Ki Kyung Jung, Hang Mook Rheu and Seung Hee Kim^

Korea Food and Drug Administration, Seoul 122-704, Korea

Abstract —— This study was undertaken to test for antiviral activity of the aqueous extracts prepared from 4 medicinal plants of Korea {Terminalia chebula, Sanguisorba officinalia, Rubus coreanus, Rheum pal­

matum). Aqueous extracts were assayed for the inhibition of hepatitis B virus (HBV) replication by mea­

surement of HBV DNA and surface antigen (HBsAg) levels in the extracellular medium of HepG2 2.2.15 cells. All extracts decreased the levels of extracellular HBV virion DNA at concentrations ranging from 64 to 128 ng/m/ and inhibited the production of HBsAg dose-dependently. Among the 4 tested plants, Ter­

minalia chebula exhibits the most prominent anti-HBV activities. Our findings suggest that these 4 medic­

inal plants may have potential to develop as specific anti-HBV drugs in the future.

Keywords □ Anti-hepatitis B virus, HepG2 2.2.15 cell, Terminalia chebula, Sanguisorba officinalis, Rubus coreanus, Rheum palmatum.

B형 간 염 바 이 러 스 (Hepatitis B virus, HBV) 는 전 세 계 적 으 로 3억 명 이 상 o l 감 염 되 어 있 는 것 으 로 추 산 되 고 / > 극 동 아 시 아 , 동 남 머 ■시 아 , 사 하 라 사 막 주 번 , 태 평 양 군 도 및 아 역 등 에 흔 하 며 , 특 히 한 국 을 포 함 한 극 동 지 역 과 아 프 리 카 세 서 는 전 인 구 의 10% 이 상 이 보 균 자 일 정 도 로 만 연 되 어 었 다 5 B형 간 염 은 수 혈 자 ,

만 성 감 염 자 와 의 성 교 자 , HBV에 감 염 된 산 모 의 출 생 아 ,

비 경 구 적 상 습 약 물 복 용 자 , 혈 액 투 석 환 자 , 간 병 인 등 에 게 주 로 감 염 이 되 고 있 으 며 ,® 감 염 환 자 의 대 다 수 는 3~ 4개 월 만 에 회 복 되 어 B형 간 염 표 면 항 원

(HBsAg) 이 옴 성 으 로 되 지 만 , 많 은 환 자 (20~40% ) 에 서

* 본 논문에 관한 문의는 이 저자에게로 (전화) 02-380-1812 (팩스) 02-380-1811

만 성 화 되 어 간 염 , 간 경 화 및 간 암 으 로 진 행 되 는 데 ,"^ 이 경 우 에 는 정 상 인 에 비 해 100배 나 높 은 간 암 발 병 률 이 보고되고 있 다 .® 그 동 안 B형 간 염 바 이 러 스 에 대 한 많 은 연 구 에 도 불 구 하 고 HBV의 narrow host range 죽

,

Korba 박 사 등 은 HBV 유 전 자 를 인 간 의 간 암 ■ 세 포 에 도 입 하 식 HBV가 증 식 , 생 산 되 는 특 성 을 가 진 HepG2 2.2.15 세 포 주 를 사 용 하 여 항 HBV 약 효 검 색 시 스 템 을 개 발 하 여 보 고 하 였 다 .*■» HepG2 2.2.15 세 포 주 는 짧 은

458

71자 , 지유 복분자, 대황의 항 HBV 효과 459

시간에 많은시료률 검색할수 있어 용하며/® 동일

한목적으로일본에서 개발된 HB 611 세포주보다 세

포배앙이 •용서하고바어러스 수■&어 높아실험의 재현

성이 높은 것으로 보고되었다."">

가자

(Terminalia chebula)

:

한과실을 말린 것으로 항균, 강심, 진경작용등을 나

타냄이 보고되었으며/® 지유

(Sanguisorba officinalis)

는 장미과에 속한 다년생 초목인 수박풀(오이풀)의 뿌

리률말린 것으로 항균, 지혈, 구토억제 작용이 보고되

었다.^^ 복 분 자 commws)는 장미과 식물인 복

분자 딸기의 과실을 말린 것으로 콜레라균의 성장을

억제하는 작용이 있다고 보고되었으며, 대황

palmatum}

린 것으로 사하, 항균

,

보고되었다.® 최근 정 등 * 은 만성적으로 duck

hepatitis B virus(DHBV)를 감염시킨 복경오리틀 사 . 용하며 가자, 지유, 복분자, 대황이 혈청 중 DHBV

DNA량을감소시킴과 DNA 중합효소활성도를 억제함

을 보고하였다. 본 연구에서는 이들 4중 생약재들이

인간 B형 간염 바이러스 증식에 머치는 영향을

HepG2 2.2.15 배양세포률 사용하식 측정함으로써 항

«K>1러스효과를 검색하고자 하였다.

재 료 및 방 법

Georgetown 의 과 대 학 Korba 교 수 로 부 터 직 접 분 양 받 았 다 . 세 포 는 도 착 즉 시 해 동 하 여 5m M HEPES,

5%

lin, 100 mg/m/ streptomycin이 함 유 된 RPMI-1640

배 지 에 넣 어 37°C, 5% CO2 배 양 기 에 서 배 양 하 였 다 . 4~5번 의 계 대 를 거 쳐 증 식 된 세 포 는 액 체 질 소 통 에 보

관 하 였 으 며 , 이 들 을 해 동 하 여 항 버 의 러 스 효 능 검 색 에 사 용 하 였 다 .

HBV 큐 전 자 탐 침 제 조

"adr" 아 형 의 HBV 유 전 자 가 클 로 닝 된 pHBV315"®를 이 희 쉬 자 대 학 교 약 학 대 학 김 길 현 교 수 로 부 터 분 양 받 았 으 며 이 plasmid를 제 한 효 소

BamH

3.2 kb의 HBV 유 견 자 를 Qiagen(Hilden, Germany)의

gel extraction kit를 사 용 하 여 분 리 한 후 Southern blot 분 석 실 험 에 탐 침 (probe)으 로 시 용 하 였 다 .

세 포 득 성 측 정

생 약 재 수 침 엑 스 의 세 포 득 성 은 HepG2 2.2.15 세 포 에 생 약 재 수 침 엑 스 룰 세 포 배 양 액 에 섞 어 처 치 히 ■ 여 24

시 간 동 안 배 양 한 후 시 료 의 세 포 득 성 에 의 해 세 포 배 양 액 으 로 유 리 되 는 lactate dehydrogenase(LDH)의 앙 을 LDH cytotoxicity kit(Boehringer Mannheim, Germany)를 사 € " 하 여 측 정 하 였 다 .

생 약 재 구 업 및 추 출

실 험 에 사 용 된 가자

(Terminalia chebula),

{Sanguisorba officinalis),

coreanus),

대 황

palmatum)

:

당 에 서 구 입 하 쉬 경 희 대 학 교 본 초 학 교 실 에 서 감 정 을 받 은 뒤 사 용 하 였 다 . 세 절 된 건 조 생 약 1 kg을 사 용 하 여 1 0 0 g씩 나 누 어 전 자 약 탕 기 에 넣 고 물 1 liter를 가 하 쉬 100°C에 서 2~3시 간 동 안 1회 만 추 출 하 의 각 추 출 액 을 합 한 후 같 I I농 축 시 킨 다 옴 동 결 건 조 시 켜 건 조 분 말 로 만 든 후 시 험 물 질 로 시 용 하 였 다 . 각 각 의 수 탁 은 37.8%, 9.1%, 14.6%, 29.9% 이 었 다 . 생 약 재 수 침 액 스 는 각 각 51.2m&^m/의 농 도 로 물 에 30분 간 녹 이 고 이 를 1 0,0 0 0Xg에 서 1 0분 간 원 심 분 리 한 후

7]용 성 분 인 상 층 액 을 필 터 에 여 과 멸 균 하 식 사 용 하 였 다 .

세 포 주 확 보 및 배 양

실 험 에 사 용 한 HepG2 2.2.15 세 포 주 는 미 국 의

Virion HBV 증식 억제 측정

HepG2 2.2.15 세 포 를 이 용 한 생 약 재 둘 의 항 HBV

효 능 검 색 은 세 포 주 를 공 여 한 Korba 박 사 의 방 법 ® 을 기 본 으 로 변 형 하 쉬 실 시 하 였 다 .

추 출 물 의 처 처 -HepG2 2.2.15 세 포 를 24 well 세 포 배 앙 관 에 2X1 0 5 cells/well의 농 도 로 분 주 세 포 가 confluent할 때 까 지 배 양 한 다 옴 항 HBV 효 능 검 색 에 사 용 하 였 다 . 생 약 재 수 침 엑 스 의 처 치 는 37°C로 에 열 한 세 포 배 양 액 (2% FBS) 2 m/에 4가 지 농 도 의 생 약 재 수 침 엑 스 를 20^1/씩 첨 가 하 식 최 종 농 도 가 64, 128, 256, 512 ng/m/가 되 도 록 하 였 다 . 또 한 앙 성 대 조 약 물 인 dideoxycytidine(ddC, Sigma)은 최 종 농 도 가

lOjoM이 되 도 록 처 치 하 였 다 . 각 시 료 가 포 함 된 세 포 배 양 액 2 m/ 를 매 일 교 환 하 면 서 세 포 에 8^{일 간 처 치 하} 였 다 . 세 포 의 분 주 와 생 약 재 수 침 액 스 의 처 처 는 2배 수

(duplicate)로 3회 반 복 시 험 하 였 다 .

세포외 virion의 수집 - 세 포 에 생 약 재 수 침 엑 스 률

Vol. 43, No. 4. 1999

460 김태균 • 박 수 • 한형머 • 강석연 • 정기경 • 류항둑 • 김승희

처 리 한 날 로 부 터 8^{일 째 가 되 는 날 에} 세 포 배 양 액 을 수 거 하 식 3,0 0 0Xg에 서 1 0분 간 원 심 분 리 하 였 다 . 상 등 액

800 )_i/에 200 (j/의 PEG 용 액 (50% polyethylene-gly- col(PEG) 8000(w/v), 0.6 M NaCl)을 첨 가 하 여 잘 섞 어 준 후 얼 옴 에 2시 간 동 안 방 치 하 였 다 . 이 를 4°C, 19,000Xg에 서 30분 간 원 심 분 리 한 후 , 상 등 액 을 흡 입 펌 프 률 사 용 하 여 제 거 하 고 튜 브 를 잠 시 세 워 놓 아 잔 여 PEG 용 액 을 바 닥 에 모 은 후 침 전 물 이 떨 어 지 지 않 게 조 심 스 럽 게 완 전 히 제 거 하 였 다 . 이 후 각 튜 브 에

30 용 해 액 (50mM Tris-HCl pH 7.4, 5mM EDTA, 1% lauryl sulfate(SDS), 1 mg/m/ Protein-ase K)을 첨 가 하 쉬 침 전 물 을 녹 이 고 , 42°C에 2시 간 동 안 배 양 하 여 HBV DNA률 분 리 하 였 다 .

Southern blot 분석 - 세 포 배 양 액 으 로 부 터 수 집 된

HBV DNA는 0.8% 한 천 겔 에 전 기 영 동 한 후

capillary transfer 방 법 을 이 용 하 쉬 Hybond™-N+ 나 일 론 필 터 (Amersham, U.K.)로 옮 겼 다 . 이 필 터 를 공 기 중 에 서 1 0^{분 간 말 린 후 자 외 선} crosslinker를 사 용 하 여 70 mj/cm높 자 외 선 을 조 사 하 여 DNA률 고 정 시 키 고 , ECL direct™ labeling and detection system (Amersham)을: 사 용 하 셔 HBV DNA를 검 출 하 였 다 .

HBs 항원 및 HBe 함원의 측정

세 포 에 생 약 재 수 침 엑 스 를 처 치 한 후 8^{일 째 세 포 배 양} 액 을 수 거 하 여 radioimmunoassay kit률 이 용 하 여 HBs

항 원 (Abbott, U S A ) 및 HBe 항 원 (Dainabot, Japan)의 앙 i : 측 정 하 였 다 . 수 거 된 세 포 배 양 액 을 HBs 항 체 흑 은

HBe 항 체 가 표 지 된 bead틀 넣 고 실 온 에 서 20시 간 빈 응 시 킨 후 bead를 증 류 수 로 세 척 하 고 ["^1] 표 지 된 HBs

흑 은 HBe 항 체 용 액 을 넣 어 45°C에 서 3시 간 빈 움 시 켰 다 . 이 bead를 다 시 세 척 한 후 gamma counter(Pac- kaid, U.S_A)에 서 번 움 정 도 룰 측 정 한 후 대 조 군 항 원 의 앙 과 비 교 하 여 항 원 생 성 저 해 능 을 측 정 하 였 다 .

통계처리

실 험 결 과 는 Kniskal-Wallis one way analysis of variance(ANOVA) 를 이 용 하 여 통 계 처 리 하 였 고

<0.05-0.01 일 때 유 의 성 이 있 는 것 으 로 정 의 하 였 다 .

결 과 및 고 찰

세포득성 - 항 바 이 러 스 효 과 를 검 색 할 시 료 의 용 량

을 결 정 하 기 위 하 여 시 료 처 치 후 세 포 로 부 터 배 양 액 내 로 유 리 된 LDH 활 성 도 를 측 정 하 식 세 포 득 성 을 계 산 하 였 다 . 세 포 주 에 1% Triton X-lOOir 처 치 한 것 을

LDH 최 대 생 성 량 으 로 기 준 하 였 을 때 시 료 의 최 대 농 도 (512

\igJmD

15%였 으 며 , 이 는 양 성 대 조 물 질 로 사 용 된 10 dideoxycytidine(ddC)의 처 처 와 비 교 하 여 득 성 이 크 지 않 은 것 으 로 나 타 났 다 . 세 포 득 성 을 측 정 하 는 데 있 어 서

Korba 박 사 등 은 neutral red dye 톱 수 억 제 도 로 즉 정 하 였 으 나 ®> 이 방 법 과 MTT assay법 은 생 약 재 수 침 엑 기 스 가 가 지 고 있 는 고 유 한 적 색 , 같 색 의 색 깔 때 문 에 본 실 험 의 세 포 득 성 측 정 에 부 적 절 하 였 다 .

Virion HBV 증식 억제 -4중 의 ' 생 약 재 수 침 액 스 가

HepG2 2.2.15 세 포 에 서 HBV의 증 식 을 억 제 하 여 세 포 외 로 virion의 방 출 을 억 제 하 는 효 과 를 알 아 보 기 위 하 식 검 액 을 배 앙 세 포 에 처 리 한 후 배 양 액 을 수 거 하 며

HBV DNA률 정 량 하 였 다 (Fig. 1). 시 료 의 처 치 기 간 은 세 포 가 confluent하 게 된 후 HBV DNA 배 출 이 급 격 히 증 가 되 어 일 정 한 잉 =외 바 이 러 스 가 지 속 적 으 로 검 출 되 는 8^{일 간 으 로 하 였 다} . Fig. 1에 서 보 는 바 와 같 이 가 자 , 지 유 , 복 분 자 , 대 황 수 침 엑 스 는 시 험 한 전 농 도 에 서 농 도 의 존 적 으 로 HBV의 증 식 을 억 제 하 였 다 (Fig.

1). 가 자 (T

chebuld)

조 물 질 인 10 /iM ddC 보 다 버 의 러 스 증 식 억 제 효 과 가 우 수 하 였 으 며 256|xg/m/ 이 상 농 도 에 서 는 버 의 러 스 의 증 식 을 현 저 하 게 억 제 하 여 세 포 배 양 액 으 로 유 리 되 는

relaxed circular(RC) HBV DNA가 거 의 관 찰 되 지 않 았 다 . 본 실 험 에 서 사 용 된 ddC 처 치 농 도 10 /iM은

Korba 등 » 에 의 해 HepG2 2.2.15 세 포 에 서 ECgo (90% effective concentration: HBV의 증 식 을 90%

억 제 하 는 약 물 능 도 ) 가 6

nUS.

여 정 하 였 으 며 , Fig. Klane PC)에 서 와 같 이 10

fiM

ddC는 HBV의 증 식 을 완 전 히 억 제 하 쉬 배 양 액 내 에 서 의 virion DNA band가 거 의 관 찰 되 지 않 았 다 . 지 유

(5.

officinalis)

유 사 한 버 이 러 스 중 식 억 제 효 과 를 나 타 내 었 고 , 256 ng/

m/ 이 상 의 농 도 에 서 는 버 이 러 스 증 식 을 완 전 히 억 제 하 여 DNA band가 거 의 관 찰 되 지 않 았 다 . 복 분 자 (i?.

coreanus)tr

palmatum)&

J. Pharm. Soc. Korea

가다, 지유 복분자, 대황의 항 HBV 효과 461

Terminalia chebuls

M C C P C P C l 1 2 2 3 3 4 4

IR C

3kb»

M C C PC PC 1 1 2 2 3 3 4 4

Rubus coreanus_____

고 ^ ^ 근^ / " ^ 1 ,나 - 누 3 3 4 측 IR C

3kb> F 텔! 배i

■ ■■야；aaa^i축해

# 흐^-■

3kb»

Rheum palmatum

M

y ii l

m S x M . . t

IRC

F ig .l — Effects of the aqueous extracts of 4 medicinal plants on anti-HBV activities. The HepG2 2.2.15 cells were treated with 64 (lane 1), 128 (lane 2), 256 (lane 3), 512 |lg/m/ (lane 4) of the aqueous extracts and 10 |IM dideoxycytidine (lane PC) as a positive control for 8 days. Samples were loaded in duplicate. HBV DNA in culture media was harvested and analyzed by Southern blot hybridization. Lane C, not treated with test sample; M, size marker (X/Hind III); RC, relaxed circular HBV DNA.

전 히 억 제 되 지 않 아 DNA band가 관 찰 되 었 으 며 최 고 용 량 인 512 ^•lg/m/ 에 서 는 DNA band가 관 찰 되 지 않 았 다 . Fig. 1에 서 검 출 된 HBV DNA band의 양 을

densitometer 및 Bio-Profil image analysis program (Vilber Lourmat, France)을: 이 용 하 여 죽 정 하 였 을 때 가 자 수 침 엑 스 의 HBV DNA 증 식 억 제 에 대 한

EC5q(50% effective concentration) 가 64|xg/m/ 이 하 이 었 으 며 지 유 , 복 분 자 , 대 황 은 모 두 ECso가 128 ^ig/

ml

의 혈 청 에 서 분 리 한 HBV DNA polymerase의 저 해 활 성 을 측 정 하 였 을 때 대 황 , 가 자 , 지 유 , 복 분 자 의 순 으 로 억 제 활 성 이 있 다 고 보 고 하 였 으 나 , 본 실 험 에 서

2.2.15 세 포 주 를 이 용 한 HBV virion의 증 식 억 제 작 용 은 가 자 , 복 분 자 , 지 유 , 대 황 의 순 으 로 나 타 났 다 . 이 와

같 은 상 이 한 순 서 는 효 능 검 색 시 스 템 이 다 르 기 때 문 인 것 으 로 사 료 되 나 4가 지 생 약 재 모 두 현 저 한 항 버 의 러 스 효 과 를 나 타 내 었 다 .

또 한 정 등 " * 의 보 고 에 서 는 이 들 4종 생 약 재 수 침 엑 스 가 B형 간 염 러 스 의 표 면 항 원 (HBsAg) 에 결 합 능 이 ' 높 은 것 으 로 나 타 났 다 . 이 는 본 실 험 중 HBV 증 식 억 제 효 과 를 측 정 할 때 배 양 액 내 의 virion을

polyethylene glycol(PEG) 침 견 법 으 로 수 거 하 는 단 계 에 서 시 료 가 HBsAg과 결 합 하 식 HBV 침 전 을 방 해 할 가 능 성 이 있 으 므 로 이 률 검 증 하 기 위 해 시 료 률 처 치 하 지 않 은 대 조 군 의 배 양 액 과 생 액 재 시 료 를 섞 어 37°C

에 서 2^{시 간 동 안 둔 후 전 술 한 방 법 으 로 바 이 러 스 를 분} 리 하 식 virion DNA의 양 을 살 펴 본 걸 과 , 이 돌 생 약 재 시 료 는 전 농 도 에 서 HBV DNA band의 양 에 아 무 런

Vol. 43, No. 4, 1999

462 김태균 • 벅민수 ■한형미 ■■깅석연 ■정기경 ■류항묵 • 김승희

T a b le I - Inhibition of HBsAg production by the aqueous extracts of medicinal plants in HepG2 2.2.15 cells

Botanical name(Chinese) 64

Concentration of the plant extracts (|Xg/m/)

128 256 512

%

Sanguisorba officinalis Rubus coreanus (M it F) Rheum palmatum {KM) dideoxycytidine (ddC, 10 |iM)

52.5 ± 4.2*

5.5 ± 0.5 29.4 ± 1.1*

16.2 ± _1.6 14.4 ± 4.1*

90.6 ± 1.2* 92.6 ± 0.7*

33.1 ± 1.4* 87.4 ± 2.0*

68.4 ± 3.3* 86.9 ± 0.7*

36.1 ± 1.4* 61.5 ± 0.9*

95.8 ± 0.9*

96.4 ± 0.6*

95.9 ± 0.7*

77.9 ± 2.5*

The inhibition of HBsAg production was analysed by radioimmunoassay (RIA) and inhibition percentage was calculated using the fol­

lowing equation, !(%)=[ 1-(T-B)/(N-B)] X 100 (I: inhibition of HBsAg production, T: cpm of treated group, N: cpm of non-treated group, B: background cpm). Values are mean ± SE for 4 separate experiments.

*: Significantly different from control (pcO.Ol)

영 향 을 주 지 않 는 것 으 로 나 타 났 으 며 (data not shown), 따 라 서 시 료 가 HBs 항 원 과 결 합 할 지 라 도

HBV 증 식 억 제 효 과 측 정 실 험 에 는 영 향 을 주 지 않 을 것 으 로 사 료 되 었 다 .

HBV 항원의 생성 억제 - 생 약 재 처 치 후 세 포 배 양 액 내 의 HBV 항 원 의 앙 을 측 정 한 결 과 를 Table I에 표 기 하 였 다 . 가 자 , 지 유 , 복 분 자 , 대 황 은 전 농 도 에 서 농 도 의 존 적 으 로 HBV 항 원 생 성 을 억 제 하 였 다 . 가 자 는 64 ng/

m/ 에 서 HBV의 표 면 항 원 생 성 을 무 처 치 ■ 군 에 비 해 52.5%

로 억 제 하 였 으 며 128ng/m/ 에 서 는 90.6% 로 억 제 하 였 다 .

가 자 는 다 른 생 약 처 처 군 에 비 해 시 험 한 견 능 도 에 서 가 장 현 저 하 게 억 제 효 과 를 나 타 냈 으 며 이 는 생 약 재 처 치 후 세 포 배 양 액 내 로 방 출 되 는 virion DNA의 중 식 억 제 를 측 정 한 시 험 결 과 와 일 처 하 였 다 . 저 농 도 인 64^ig/mWl

서 는 지 유 가 다 른 생 약 에 비 해 항 원 생 성 을 가 장 미 약 하 게 억 제 하 였 으 나 다 른 고 농 도 에 서 는 대 황 미 가 장 미 약 하 게 억 제 타 였 다 . 가 자 , 지 유 , 복 분 자 는 256|og/m/ 에 서

85% 이 상 , 512 에 서 95% 이 상 의 항 원 생 성 억 제 효 과 률 나 타 내 었 다 . 양 성 대 조 약 물 인 ddC는 14.4% 의 낮 은

HBs 항 원 생 성 억 제 도 를 나 타 내 었 고 이 는 Kruining 등 "«

의 보 고 와 일 치 하 였 다 . 이 같 은 결 과 는 ddC가 세 포 질 에 서 HBV genome의 복 제 는 저 해 하 나 , HBV 전 사 체

(mRNA) 로 부 터 생 성 된 HBs 항 원 이 endoplasmic reticulum의 세 포 막 에 서 HBV 유 전 자 없 이 항 원 꺼 리 self assembly 되 어 fila- ment 및 sphere 형 태 로 골 지 체 를 거 쳐 세 포 외 로 배 출 되 기 때 문 에 * 지 HBV 항 원 생 성 의 억 제 효 과 는 미 약 한 것 처 럼 나 타 나 는 것 으 로 사 료 된 다 . HBe 항 원 의 양 을 측 정 한 결 과 는 4종 의 생 약 재 모 두 에 서 처 치 농 도 군 과 대 조 군 과 의 변 동 이 심 하 식 HBe 항 원 의 생 성 억 제 도 를 측 정 할 수 없 었 다 .

가 자 는 견 통 한 약 처 방 에 서 간 염 이 나 황 달 의 치 료 에

사 용 되 지 는 않 았 다 . 그 러 나 , , 최 근 가 자 의 추 출 물 이 제 1 형 hepes simplex virus(HSV) 와 cytomegalovirus (CMV) 에 대 해 항 버 o] 러 스 활 성 을 나 타 내 며 IMS* 인 간

immunodeficiency virus(HIV) 의 역 전 사 효 소 의 활 성 을 억 제 한 다 고 보 고 되 었 다 .® 특 히 DHBV률 감 염 시 킨 북 경 오 러 에 서 4중 생 약 재 중 가 장 우 수 한 항 버 이 러 스 효 과 를 나 타 내 었 으 며 ,® 본 실 험 에 서 도 동 일 한 결 과 률 나 타 냈 다 . 지 유 , 복 분 자 , 대 황 은 역 시 전 통 적 으 로 간 염 이 나 황 달 의 치 료 에 사 용 되 지 않 았 으 며 , 정 등 이 DHBV의 항 바 이 러 스 활 성 에 대 한 보 고 와 본 실 험 에 서 인 간

HBV에 대 한 중 식 억 제 작 용 을 나 타 낸 걸 과 로 이 들 생 약 재 돌 의 항 바 어 러 스 활 성 이 새 롭 게 밝 혀 지 고 있 다 .

이 러 한 결 과 돌 로 4종 의 생 약 재 수 침 엑 스 내 에 는

HBV의 증 식 을 억 제 하 는 활 성 성 분 이 존 재 할 것 으 로 사 료 되 고 그 중 가 자 의 수 침 엑 스 가 가 장 현 저 한 억 제 효 과 룰 나 타 냈 으 며 각 생 약 재 의 항 HBV 활 성 성 분 의 분 리 및 동 물 실 험 에 대 한 연 구 를 계 획 중 이 다 .

결 론

HBV가 도 입 된 HepG2 2.2.15 배 양 세 포 에 서 가 자 (7：

chebula),

officinalis),

coreanus),

(JR. palmatum^

처 는 영 향 을 세 포 배 양 액 에 서 HBV virion 생 성 및 항 원 의 번 화 룰 측 정 하 ^ 다 옴 과 같 은 결 과 를 얻 었 다 .

1. 가 자 , 지 유 , 복 분 자 , 대 황 은 모 두 HepG2 2.2.15

세 포 주 에 서 세 포 배 양 액 내 HBV의 증 식 을 억 제 하 여 농 도 의 존 적 으 로 virion의 방 출 을 저 해 하 는 효 과 률 나 타 내 었 으 며 그 중 가 지 는 4중 생 약 재 중 가 장 우 수 한 항 HBV 효 과 를 나 타 내 었 다 .

2. 4종 생 약 재 모 두 는 전 체 처 치 농 도 에 서 농 도 의 존

J. Pharm. Soc. Korea

가자, 지유 복분자, 대황의 항 HBV 효과 463

적 으 로 HepG2 2.2.15 세 포 의 HBs 항 원 생 성 억 제 작 용 을 나 타 내 었 으 며 가 자 , 복 분 자 , 대 황 , 지 유 의 순 서 로 현 저 한 억 제 작 용 을 나 타 내 었 다 .

따 라 서 상 기 4종 의 생 약 재 수 침 엑 스 에 는 HBV의 증 식 을 억 제 하 는 활 성 성 분 이 존 재 할 것 으 로 생 각 되 며 본 실 험 결 과 가 항 HBV 치 료 제 개 발 에 활 용 될 수 있 으 리 라 사 료 된 다 .

감사의 말씀

본 연 구 는 보 건 복 지 부 의 보 건 의 료 기 슬 연 구 개 발 사 업 지 정 과 제 연 구 비 (HMP-98-P-0036) 지 원 으 로 수 행 되 었 으 며 지 원 에 감 사 드 럽 니 다 .

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