Abnormal Hemoglobin Studies in Koreans

Journal of the Pharmaceutical Society of Korea 20. 70-75 C1976：)

I I

텔 의 롭 할 에 관한

효

# - m

m m ± m

CReceived February 7i 1976)

Ihl-Hyeob Ro (Pollege o f Pharmacy^ Sookmyung Women s University^ # Seoul 140)'. Abnormal Hemoglobin Studies in Koreans

A bstract—Two males and one female in the group of 5020 Korean school children and university students in Seoul and Tae­

jon were found to have a slow hemoglobin to normal hemogl­

obin A. In all three subjects the slow component migrated at a rate characteristic of the G hemoglobin. By urea-starch-gel electrophoresis in alkaline pH. and Chernoff method was de­

monstrated that another 3 cases of abnormal hemoglobin also were beta-chain variants. This was reconfirmed by hybridization exp­

eriment with canine hemoglobin. And the results of fam ily test of 3 cases of abnormal hemoglobin were heterozygous carrier.

출

!황뿐에 있어서 록끓 H b 의 융 ^ 를 살펴보면 Thailand, Burma, Cambodia 품ftfe는 HbE 가 높 은 i t 후로 되어 있고 에 는 H bH 가, 또 팔에 는 H bM 이 많다는 것 은 널리 알 려 져 있으며 은 H b 의 {품 * 가 낮지 않을 것 이 a s 된다.

6-251&SL을 활 « 로 HbS, HbC 외 가 높은 와 확0 * 1 4 ® 의 외 ffi초쏠 으로 록할 포집그 의 screening test 가 허 릎||되 었 다. 풀놓는 쫓텔

Naval Medical Research Unit~2) 의 Dr. R.Q. Blackwell 와 더 불어 1966부 8E 황텔에 서 처옴 으로 의 S / v 2110^에 대하여 screening test 한 ^ ；롱 의 록쌓 Hb {무:결월를 f l 료하 여 그 뿔 로 : 및 짧^;콩에 의하여 HbG TAEGU 라고 *춤;S 하여 ® 송니^한바 있다.

1968후 품떻는 한으로 H bG TAEGU 의 를 몇 K 코자 absorption spectrum, alkali de- naturation, chainanomaly 및 proband 외 웅:별l i S 를 S 한 쯤에 관하여 황송^그 한 바 있

다. HbG TAEGU 는 heterozygot 이 며 ^-chainanomaly 임 이 밝혀 졌으며 계 속하여 HbG t a e g u

^

는 1975후 J호의 호루®I히 itffl 의 호^에 ^하여 이루어진 것이며 이에 if IS 하는 바입니다.

70

의 {b투#liS 를 췌콤질그한 바 있 는데 이 에 의 하면 jS-chain 의 22fitS외 glutamic acid 가 alanine _으_

로 되었옴이 밝혀졌다.

이때까지 텔 S A 을 f f 활으로 한 록함 H b 에 관한 는 이것이 였으며, 1963후 UJiSgs：)와 1964부 7EBB®체 의하여 를 대상으로 하여 a-chain 인 H b f u k u o k a 와 H b KAGOSHIMA 가 월송된 바 있었을 뿐이 다. 1968후 롬구그은 서울% ：부 g f f i인 황 텔 ;V 8 4 0 0

« 에 합하여 ^ 렸S흐^한 를 될송한 바 있다.

풀월-는 서울 및 의 3?호¥ 초 5020«에 대 하 여 탈 H b 의 screening test 한 짧

* , 많좋한 3혜외 록끓 Hb 에 하여 chainanomaly 를 한 바 그 를 송코저 한 다 .

n m yj m

혹황 Hb 의 ：^ttl5S~ Hemolysate 에 확하여 Smithies vertical starch gel electrophoresis^^ 및 Biackwellft®M| 따라 다옴과 같이 한다. Robinson starch 75.6 g 에 T r is - EDTA-borate buffer 560 ml 를 Jp한 것 을 Erlenmeyer flask 에 하여 하면서 burner 그그에 서

하여절 때까지 JPfV한다. 하게 된 것을 plastic mold (32X6. 5cm )에 f 빨 부 어 4사 6H총 한다. HemoJysate ^ 2 를 음 slot 에 spotting 하여 100 V, 4 ^ 7 mAC3 V /cm ), 16 h rs 떨 ;

시 켜 그 황Ibffi에 따라 록함 H b 을 헤® 한다.

Hemolysate 의 iflUS을 미 리 heparin sodium 처 리 한 에 하여 곧 3®^''하여 p la s m a 를 K농송하고 ^ ifll쌓J f 을 로 5H] 씻 어 plasma protein 을 ^술 히 솜한다. 이 'i$fe해 된

45m l 에 90 ml 의 혈 ® ; 와 toluene 40 ml 를 Sp하여 블 불 g 슴하고 2 0rHT ~25°에 두 었 다 가 ifll?찾과 의 가 잘 되도록 [럼i 외 뚫 '® * 로 a s S 슴한다. 이것을 4"에서 16, 0 0 0 rpm 으로 3O：0're1 팔'}it 하여 toluene 뜰과 을 버티고 맑은 i f f 만 한다. 에 사 용 하 는 과 어미개 (ffi차 의 hemoJysate 도 위와 같은 ：띠S 으로 해헬한다.

흑황Hb 의 chainanom aly 의 촌一Chernoff S 에 약간의 수정 을 JP하여 다옴과 같이 • 몇 팔 하였다. Cell 에 는 pH 8.6, 이 온 ® JK 0.1 의 veronal buffer 를 , 웰：f f iS 에 는 28% ISfP KC1 를 사 ■ 용한다. Starch-gel 는 111. 40g 의 Robinson starch 에 pH 8. 0 의 gel buffer 450 ml 를 Jp 하여 ：털 슴한 다옴 70° i U f 에 서 하면서 해 »하 여 plastic mold 에 부어 5-■선I랴H 방치후 사 용 한 다 -

Take고호그에 따라 만든 globin 을, cell-buffer 50 ml 에 2-mercaptoethanol 0. 5 ml 를 Jp한 에 4g/dl 되 도록 ^ 월하여 3할 '시 킨 것 lOjul 를 starch gel slab 에 spotting 하여 200 V, 50 m A ,

4°에서 할 * i^ S j시켜 그 에 따라 한다.

Urea-starch gel electrophoresis— 36. 0 g 6 M ) 와 Robinson starch 12. 5 0 g 을 ?1휴에 서 잘 하여 500m] 의 beaker 에 넣 고 Tris-EDTA-borate buffer (pH 8.1) 70 m l 와 2-mercaptoethanoI 0. 35 를 넣 어 잘 부유시 켜 500 ml 의 flask 에 옮기 고 , 70°외 에 서

여 urea-starch gel 을 만든다. 또 Hb jg ® ^ 3 g/dl 의 !해®된 H b A i 및 록할 H b

# 20 //1 에 Tris-EDTA-borate buffer (pH 8.1) 2 0 fA 및 출 30 m gO g^'iSffi & M ) 를 하 여 S •눌병fS시 키 고 4°에 서 하루밤 KcH한다 • 그 15/d 를 urea-starch gel 외 다3;축해에 spotting 힘 : 다옴 15V/cm, 3m A/cm , 4°에 서 5 짧PbI 시 켰 다.

H ybridization experiment~ Huisman 고2'에 루하였 으며 HM fe,맺 3 g/dl 의 록좋 H b 과 , 개의 hemolysate (Hb can) 은은 0 .2 1111를 g 슴하고 이것을 ：! ：중하여 우은 0.1 M -acetate buffer (pH 4. 7) 에 서 1 0 FsT 한 다옴> Tris-EDTA-borate buffer (pH 8.1)에 다시 20T ^ ^

June. 1976 M ^ ^ U 71

72 홈：$추텔A의 록 황 트 Vol. 20, No. 2

t각한다* 나더 지 우은 Tris-EDTA-borate buffer (pH 8.1)에 서 만 2l^T0l jS

켰다. 에 는 pH 9. 0외 boric acid-NaOH buffer 를 넣 고 t3i!l한 조건에 서 i3c®

켰 다•

i!종

Hb 의 환 Proband 및 IE함 hemolysate 에 대 하여 electrophoresis 한 는 Fig. 1 파 같다. fe lL h 찮ffiife은에 따라

T A E JO N

이 라고 한다.

mmM

502(Kg에 대하여 1* 쓸한 ig용, 31깨외 록끓 Hb 동결쩔를 혹*하였으며 starch-gel-electrophoresis lE ^ Hb-A 에 뒤 따르는 slow-moving hemoglo­

bin 을 가지 고 있는 록할 Hb 들이 다. 3헤외 록함 Hb 들은 서로 거의 같외 를 나타내고 있으며 용

$6]®는 HbG TAEGU 와 헬1tl한 slow-moving hemog­

lobin 들이 다.

휴로 Hb SEOUL-(I) 은 * 탈할P둥

seoul-(2) 는 Hb ta-

E J O N

은

루®

를부 롯？로이었 다.

흑®

Hb

一

Chernoff ft 에 f t 한 chainanomaly 몇S늦S l l 는 Fig. 2에 서 보는

globin

a-chain 은 으로, /3-chain 은 H S 으로 용감하였으며 HbG

Smithies vertical starch gel Hb

및 Hb

( n T f m j m p f n r

4ft

0 ©

4 )

mm

I t i

황

T W | W r p ] fn ] T | ifT !y r iiiiif| if

©■

Insert

Fiff. 2— Vertical starch gel electrophoresis patterns of identifying for chainanomaly of proband's he­

molysate.

Cl) ： H bG T A E G U , (2) ： normal A , (3) ： H b s e o u l

-1, (4) ： H b s e o u l - 2 (5) ： Hb t a e j o n

Fig. 1— Starch gel electrophoretic patt­

erns (Tris-EDTA-borate buffer pH 8.9) of hemolysate of normal and proband.

Amidoblack lOB stained,

CO ： H b T A E G U , (2), (3) ： normal A, C4) ： H b SE O U L-1, C5) ： H b s e o u l - 2 , C6) ： Hb T AE JO N .

를 비롯하여 Hb

Hb

은

IFS* globin

jS-chain

하였다.

Urea-starch electrophoresis 에 f t 하여 pH 8.1에서 8 M 물 *로 ^ 시 켜 i9c®j시킨 g * 는 Fig. 3과 같이 H b A 에 있어서 는 에 한 f i 의 band 와, 으로 ®요 ®

한 2® 의 band 가 있으며 Hb

(2)

Hb

ItgffilJ

normal A i과 같고,

IE*닭 HbAi외 /SA 보따 빠르던서 JE끓 A l에 뒤 따르 는 band 가 있 다.

Hybridization experiment— 텔외 iS S 는 Fig. 4와 같다. HbAi과 Hb can 을 [qg S

#

#

# June, 1976 m m ^ m 73

(1) ,

(2) Z t '빠

(3) i

% ：■

(4) I ^ k 1

*|fit|iiyt|!|f!ijiii|ttyHipiijni：.'y '

© 예 --- 1 --- © In s e rt

Fig. 3~Urea-mercaptoethanol-tris-EDTA-borate buffer (pH 8.1) starch gel electrophoretic patterns of H b A l and abnormal Hb.

Amidoblack 10 B stained.

C O： H bA i, 0 0： H b SEOUL-1, (3) ： Hb seoul-2, (4) ： H b T AEJO N .

- - 9 m * * m

혜 r m •

I m i

S I

쫓

Tnrpn|Tr^fTfffTjriT]피^^

© i

Insert 0

Fi&. 4우Starch gel electrophoretic patterns(T ris*

EDTA-borate buffer pH 8 . 0 of h y b rid izatio n , experiments. ^

Am idoblack 10 B stained.

Cl), ClO* H b s E O iJ L - 1 , C2'), (20* H b s e o u l - 2 » ( 3 ) , ( 3 0 - H b T AE JO N , ( 4 ) , ( 4 0 - H b G t a e g u

슴후

pH

7

buffer

pH 8.

buffer

I

(HbAi + Hb can hybrid)

는 4® 의 band

'®슴?g 을 pH 8.1

bu­

ffer

(HbAi+Hb can control)

온 H b A i과 Hb can 에 해 당하는 2 f @의 band 만 나타나 있 다. H b A i+ H b can hybrid 에 서 생 긴 4® 의 band 다떼 서 ^{2 f @}는 훌홀 H b A i과 Hb can 과 一봤하는 band 이 다. Hb s e o u l - ( I ) , (2) 및 Hb TAEJON 3예 모두 에 거 의 같은 를 나타내 는 2 f f l와 4ffi의 band 가 있 다 .

황;!S 웨{푸M S - t S K 의 * 함 에 따라 출 *별 에 대하여 t i * 한 램 * 는 다옴과 같다.

Hb

(1)

Hb

^ t r

3： g

Hb

i £

； $

Hb

(1), (2)

Hb

수를® 및 들이며 다IL 느 하며 ftSU한 향 항이 없 다 고 한 다 .

m

흑끓

의

를 논®하기 위하여

에서

을 :S'® 하여 이 것에 대하여

i졌에 따라

이 를 함유하는

/크 를

하여

의

라고

있는

이 다.

다옴 urea dissociation electrophoresis 에 의 하여 pH 8 . 1 의 8 M 술로 ® 밸시 컨 다 옴 Tris- EDTA-borate buffer (pH 8.1) 를 사용하여 urea-gel 을 만들어 chain타nomaly 를 한 ^ ；S:, 3M 모 두 ^-chain 이 라고 f t SO할 수 있 다.

끝으로

에 의 하여 H S tll과였 다-

은 4® 의

chain 으

로 된 tetramer 로서 pH 4. 5~6. 5와 pH 11에 서 텔 *하 여 초로 dimer 로 하며, pH 3. 5W T 와 11. 5IU_fci에 서 Hb 은 한다. H b A i은 a 흐/32스p = i2 a흐 와 같이 tetramer, dimr 및 monomer 가 fflS 주* K K I에 있으며 pH 를 낮추어 주면 주 * 은 으로 하고 +>14으

로 하여 주면 로 으로 되어 라는 의 tetramer 로 된다.

H A A l과 Hb can 을 i령 m 하여 pH 4 .7외 buffer에 서 편|lf시 켜 텔14으로 하면 <*요+|S을 + arV S r"~ ►2«A/3A+2a"*"/3^""~ 야2«*+ 2；8표+20：^""+2/3=^표"으로 혐ffi하고 이것을 수| 0하면 이들 홀 monomer 들은 ■되 어 dimer 를 거 쳐 tetramer 가 5많몇된다. 이 때 되 는 tetramer 의

는 2aM-2^나 2a"""+ 2；S대" ~ »ar"i82M~atj9^ + a r 'i3r + a i 5l °"의 네 1@가 되며 이다> 2® 는 5|5의 Hb A l과 Hb can 과 같은 tetramer 이 지 만 a|®";S호와 a 충7r|"" 은 새 로이 ?많 ^된 hybrid tetramer 이 며 8c® 황lilffi가 은은 다르기 때문에 starch gel 또는 agar gel 에 서 이 것 들의 쌓을 i람®I시키면, U S 으로부터 « r 범 오 /3호, aa°"/3f" 및 a 호jS5새 의 )IM으로 흡용 융* 된다.

HbG TAEGU (M M X Hb SEOUL-(l), (2) Hb t a e j o n 과 Hb can, H b A i과 Hb can 을 뿐빨시 켰다가 다시 ■숨시 킴 으로서 새 로 ?많®;된 hybrid tetramer t f ：용 ® ® 가 느린 것 들은 («"'와 /S'"새 에서 생긴 것) HbG TAEGU, Kflfc Hb SEOUL (1), (2) 및 Hb t a e j o n에서나 서로 비숫하지만 황

» K 가 빠른 것 0 '*"과 |8어1서 생 긴 것)들 은 서 로간에 황！!;S 의 블가 약간 있다. 그 4 ■에 서 HbG TAEGU 의 것 이 보다 빠르고 나머 지 3헤는 버 숫한 황S ；® 를 나타내 고 있 다. y j ：；외 chain­

anomaly 닭 을 를 ^ • 늦많SJ한 짧S Hb SEOUL (1), (2) 및 Hb t a e j o n 모두 ^-chain 황혹S 이다.

*£ Im

평 :*¥ 토을 황으로 하여 록■SMife* 외 ；됐후I 혹,fe, 그리고 많몇된 ；록 외 * 록S 을 W 햇한 바 다옴과 같은 g i t 을 얻었다.

1. 5020«의 f t * 수, 3g|의 록 별 를 많* 하였다. 이 텔 *에 f t 하면 ® 히 높지 않은 0.06% 의 {?：휴a s 를 나타내 고 있다.

2. Hb SEOUL 1 및 2, Hb t a e j o n 은 HbA 보다 느린 하Sjffi를 나타내 는 slow moving hemo­

globin 들이 다.

3. Hb SEOUL 1 및 2, Hb t a e j o n 은 ^-chain S 화 ffl이 다.

* 없

1. R .Q . Blackwell, I.H . Ro, J. T-H Huang and L.C. Chien, J . Formosan Med. Assoc., 55, 29 C1966).

2. R .Q . Blackwell, I.H . Ro and J.i-T-H. Huang, Science, 158, 1056 C1967).

3. 7. 3 7 7 ewes).

4. R .Q . Blackwell, I.H . Ro, C.S. Liu, H .J. Yang, C.C. W ang and J. T-H. Huang, Am. J . Phys.

Anthrop., 30, 389 O97C0.

5. O j r a ^ r . w m , 10, 181 C1963).

6. 0 솔 symposium, 1964.

74 # ： 황0A 의 록■Sjllfe좋 Vol. 20, No. 2

#

#

#

June, 1976 m m ^ m 75

7. B.S. Shim, C.S. Kim , S.U. Chon, T .H . Lee, Y.S. Kang and K .J. Hong, J . Korean Med, A.ss,：

11, 67 C1968),

8. O. Smithies, Biochem, J., 71, 585 Q959),

9. R .Q. Blackwelland J. T-H Huang, Clin, Chem.y 11, 106 Q965).

10. A .I. Chernoff and N .M . Pettit, Jr., Blood, 24, 106 (I9 6 0 ,

11. 36, 387 (1964).

12. T .H .J. Huisman, Adv. Clin. Chem., 6, 231 C1965).

#

m